植物害虫的室内检疫检验方法

第五节　植物害虫的室内检疫检验方法

检疫性害虫主要包括昆虫、螨类和软体动物等，其中昆虫所占比例最大。这些害虫远距离传播的途径很复杂，有的通过虫体附着在调运的植物及其产品的表面，或潜伏在受害植物组织内，有的通过产卵在植物材料或种子中，随着这些材料的调运传入异地。此外，害虫可以主动迁移，因此各种包装材料、铺垫材料及运输工具等都有可能携带害虫。

各种害虫有一定的寄主范围和危害状，根据寄主植物上危害状和害虫形态特征一般较容易作出判断。有的害虫个体较大通过肉眼观察即可作出初步判断，但有的昆虫个体较小，往往需借助一些仪器，如体视显微镜或双目扩大镜等进行观察鉴定。此外，害虫的生活史中存在不同的虫态，有时卵、幼虫和蛹的鉴别较困难，还需要进行饲养，然后再作鉴定。

一、害虫的饲养

在现场检疫过程中经常会截获昆虫的幼虫或卵，鉴定有一定的难度，必须经过室内饲养为成虫后再鉴定。同时在口岸截获一些不常见害虫时，也需通过饲养得到这种昆虫各发育阶段或某一虫态的完整标本才能便于鉴定。

昆虫的种类繁多，饲养方法和设备各有所不同，现就室内饲养方法略作介绍。

1.养虫箱饲养

养虫箱的框架和养虫箱的板壁多用木料、纸制、玻璃、透明塑料、金属纱网制成，在箱的一侧安装一小门便于放置植物饲料和取虫。在箱底安装可盛土的抽屉或一个可开启的小门便于放人盛土的器皿，同时便于清除虫粪和虫子入土化蛹或产卵于土中。

2.加罩养虫器饲养

以栽种有饲料植物的花盆为底，用带有支持物的尼龙纱罩将植物罩上。这种养虫器适于饲养体型小，活动范围有限，需要鲜嫩饲料植物的昆虫。尼龙纱网一般40目，目数过大通风采光受影响。

3.指形管饲养

这种养虫器适于饲养个体小，数量少的昆虫。将叶片或小枝条连同虫子一起放进带软木塞的指形管内，放在温度适宜的培养箱内饲养。在饲养过程中，应经常清除虫粪和更换干净、干燥的指形管。

4.木盒或玻璃缸饲养

木盒的四壁及底部是木质结构，在相对的两面留一个大小适当的纱窗口以便通风透气。木盒上部离上沿5～10cm处留一凹槽，以便套橡皮筋或系绳，在木盒上部蒙一层尼龙纱网。为了保持木盒具有一定的湿度，在盒底铺垫些沙土或半干土壤。仓储害虫的饲养采用玻璃缸或罐头瓶饲养，缸或瓶内放置一个三角形铁丝架，架上放多层用木板做的隔层。为了给昆虫提供饮水，饲养时在缸底放一小器皿，皿内放浸了水的脱脂棉。为了防止昆虫逃逸，在壁的内侧上部3～5cm处抹一圈凡士林液体石蜡混合物（1∶1）。

二、植物害虫标本制作技术

1.幼虫浸渍标本制作

将采得的幼虫或较大的卵用清水煮片刻，然后用保存液进行浸泡保存。保存液具有杀死和防腐等作用，常用的保存液和固定液有以下几种。

（1）A.F.A混合液由95％酒精15份、福尔马林6份及冰醋酸1份配制而成。

（2）10％氢氧化钾溶液氢氧化钾10g加90ml蒸馏水溶解，然后定容至100ml。用于标本解剖处理。

（3）福尔马林溶液1份福尔马林（含甲醛40％）加17～19份蒸馏水。用于虫卵的保存。

（4）酒精溶液在75％的酒精中加入0.5％～1％的甘油而成。用于成虫和幼虫的保存。

（5）莱氏溶液17份95％酒精加2份冰乙酸、6份甲醛、28份蒸馏水摇匀而成。用于虫体形态固定和标本保存。

（6）霍氏封片液将302阿拉伯树胶放入50ml蒸馏水，置于50～90℃水浴溶液中，待树胶全部溶解后再加入200g水合氯醛和20ml甘油，用玻棒搅匀而成。用于虫体封片。

2.成虫标本制作

对于比较大的个体，针插标本为最基本的制作方法。取新鲜标本或经过回软处理（采用酒精浸泡）过的标本，用与虫体大小相适应型号（分为1号、2号、3号、4号、5号）的昆虫针插上。如鞘翅目昆虫，可用昆虫针在右鞘翅近基部1/4处插入，要求昆虫针与虫体垂直。其步骤是在三级台的第3级上用针刺入虫体，昆虫针从3级台的孔直插到底，然后将针从孔中拔出，反转过来，针头朝下再穿入第1级上的小孔，使虫体背面紧贴三级台的第l级平面，将针头插到底，虫体背面与针头的距离为8mm，这样虫体在昆虫针上的位置就固定了。昆虫经针插之后，需要整理姿态，如足及触角，使前足向前，后足向后，中足向两侧，触角伸向前方，两侧的附肢保持对称。整好姿后，可用昆虫针将成虫的足及触角固定，放进低温干燥箱内干燥几天，昆虫的姿态就会定型。然后，在三级台的第2级面的高度插上采集标签，注明采集时间、地点和进口国家，再在第1级面的高度插上定名鉴定标签，注明鉴定人的名字和昆虫的拉丁名。采集标签用白卡片纸印成15mm×8mm的方框形。

对于比较小的个体，可采用粘制法。其做法是将昆虫针插入小三角纸，使三角纸的平面与昆虫针垂直，距针头8mm。用镊子将三角纸的端部向下弯成一个斜面，在斜面涂上白乳胶，将虫体胸部右侧、中后足之间粘在三角纸上。再用两个采集标签分别注明采集时间、进口国家和鉴定人的名字、昆虫的拉丁名。将做好的标本整齐地插入标本盒内，在标本盒的一角放入对二氯苯或樟脑块，然后密封盒盖保存。为了长期保存标本一般采用对二氯苯，因其防虫效果较好，但对工作人员身体有些影响，因此要注意安全。

为了美观，在展示昆虫标本时，针插标本可采用无色透明的玻璃钟罩封存起来。钟罩呈圆筒形，下方卡入塑料底座的沟槽内，一般情况下一个钟罩内放1头标本。为了永久地保留昆虫标本，对于中小型的昆虫个体，经整姿后（标本）不用针插，可以做成活页式表盖标本。制作方法按活页夹的大小，取透明的有机玻璃板，表面擦光，涂少许白乳胶粘住昆虫体的腹部，在虫子后面贴上定名标签，然后加盖表盖。沿表盖边缘用注射器注入氯仿液体，表盖很快就会和有机玻璃黏合在一起。每张有机玻璃板的边缘再贴上有机玻璃条，将相邻玻璃板之间隔开，以避免相邻玻璃板上的表盖受到摩擦而降低透明度。最后在每页的左侧打洞，装入活页夹。用这种方法制成的标本携带方便、制作美观，防潮防蛀，易于观察，但封存的标本不得随意打开，不便作详细观察之用。

3.标本的解剖和制片

（1）标本的解剖对有些害虫有时仅凭外部形态很难鉴定到种，必须解剖观察成虫或幼虫的外生殖器或其他细微结构进行辅助鉴定。在解剖之前，将保存液内的标本移入10％氢氧化钠溶液内浸泡12～20h，或用酒精灯温火煮用10％氢氧化钠溶液浸泡的虫子至腹部透明为止。标本经碱液处理后，用清水冲洗，然后移入小培养皿内，加少量水或酒精，在双目扩大镜下解剖。

以谷斑皮蠹属害虫为例，其解剖的过程为：

①幼虫的解剖观察因幼虫需要观察的主要特征之一是上内唇，解剖时，培养皿内水或酒精的量刚好淹没昆虫，用解剖刀取下幼虫的头部，腹面向上，移去下唇、上颚、下颚，上内唇就逐渐显露出来，同时轻轻移走头壳的肌肉。上内唇位于上唇内部为一膜质的构造，其基部与头部肌肉相连，操作时要特别小心，防止在移去头壳肌肉时同时带走上内唇，因为上内唇上有我们需要观察鉴定的最主要的结构特征即上内唇乳突。谷斑皮蠹属幼虫的上内唇端缘有一排扁平的缘刚毛，上内唇的端部内方有两根粗的排成“八”字形的感觉棒，“八”字形的感觉棒之间有一圆形的感觉圈，圈内乳突的数目是鉴定种的重要依据，需要在显微镜下放大400倍才能看清楚。留在头壳上的有用部分，除上内唇外还有触角。上内唇和触角可以彼此不分开，一起采用霍氏封片液封片。

②成虫的解剖观察成虫需要解剖的部分主要是头部的颏及腹部的外生殖器。解剖颏时，将成虫头部取下，腹面向上，将上颚、下颚、上唇一一移去，再去掉多余的头壳部分，仅留下唇。

③雌虫交配囊骨片在谷斑皮蠹属成虫种的鉴定也很重要。在进行种的特异性解剖时，将虫体的腹面向上，剪掉第4、第5腹板，拉出全部的外生殖器，寻找紧挨的1对具齿骨片。再寻找骨化强的球形的受精囊腺，或寻找与受精囊邻近的一个棒形带横纹的构造，然后以此为中心，在其周围寻找交配囊骨片。这些操作均须在较高倍数的解剖镜下进行，需要有耐心和细心，因雌虫的交配囊骨片很小，谷斑皮蠢的仅0.2mm，不易发现。雄性外生殖器对种的鉴定尤为重要。雄性外生殖器最有鉴定价值的部分包括腹部第8背板、第9、第10腹节及阴茎。用固定液保存并经氢氧化钠处理过的雄虫，其外生殖器有的会自动伸出体外。如果不属上述情况，可将虫体腹面向上，左手用解剖针轻压腹部末端，将外生殖器挤出体外，右手用另一解剖针将生殖器钩出，使生殖器与身体分离。外生殖器拉出之后，由后向前的排列顺序为：阴茎及阳基侧突、第10腹节、第9腹节、第8腹节。用卡莱液固定外生殖器后，以上结构清晰可辨。阴茎及第9、第10腹节被第8腹节的背板和腹板所包围，阴茎和第9、第10腹节套叠，第10腹节背板附着在第9腹节背板顶端。进行分离时，先将第8腹节分出，再将该节的背板和腹板由侧面分开，最后把阴茎与第9、第10腹节分开。第9腹节和第10腹节背板在自然状态下是连在一起的，在解剖时尽量不使二者分开。第10腹节腹板略呈三角形，第10腹节背板小而脆弱，自然状态下第10腹节腹板与背板连接不紧。

（2）标本的制片封片可采用何燕尔封液，其配方如下：

蒸馏水50g水合氯醛200g

阿拉伯树胶30g甘油20g

配制时，先将树胶放人蒸馏水中，置50～80℃水浴中。待树胶全部溶解后，加入水合氯醛和甘油，用玻棒将上述溶液调匀，溶为均一的胶状物之后，抽气过滤去掉小的颗粒即成。

为了制作较好的玻片，按照下列要求进行：

①盖玻片、载玻片必须十分清洁。放置太久的玻片，上面会笼罩一薄层霉菌，使用之前可用酒精棉球擦洗干净。如果玻片是使用过的，需用去污粉浸泡，然后擦去污垢，用清水洗净。必要时用超声波清洗仪清洗。

②封液力求纯洁，不含杂质颗粒。使用封液时尽量用上层液，封片时封液用量以正好充满整个盖玻片为宜。如果封液过多，多余的封液流到盖玻片外，弄污载玻片影响美观，或由于液层太厚，需要观察正面结构的封入物往往呈倾斜状态，影响观察结果。

③加盖玻片之前，在解剖镜下进一步清除标本上不相干的组织及封液内的杂质颗粒，用解剖针尽可能地排除气泡。加盖玻片时，使玻片一侧先接触载玻片，然后将另一端徐徐放下，切勿将盖玻片直接放到封液上，以免产生气泡。

④玻片制好后，最好自然干燥，或置于烘箱内，在50℃下烘12～24h。如玻片中有气泡即可自然清除，并使盖片四周的胶液逐渐干涸。在停止加热并使其在烘箱中自然冷却后，整修玻片、编号，贴上标签入盒保存。

采用何燕尔封液具有制片方法简单、标本透明度好，在解剖时不易出现标本附肢折断或脱落等优点。缺点是由于胶液系水溶性，制好的干玻片遇潮湿气候往往会吸水返潮（吸水），使胶液软化。防止胶液软化的方法是在玻片干燥后，用小刀刮去盖玻片四周的胶，然后用加拿大树胶在盖玻片四周加环。

4.害虫鉴定

具有一定昆虫分类学知识即可以识别常见的重要害虫的种类，但在检验检疫过程中会遇到一些不易鉴定的昆虫。遇到这种情况，可采取下列方法：

一是查阅有关书籍和杂志，如《中国经济昆虫志》、《中国动物志》、《昆虫分类学》、《中药材仓虫图册》、《中国储藏物甲虫》、《储藏物甲虫鉴定》、《植物检疫》、《昆虫知识》、《植物保护》等相关昆虫资料。

二是求助于专业的昆虫工作者。在检疫检验过程中，会遇到一些国内未发生过或尚未见相关报道的有害生物，利用上述书籍很难鉴定品种，这就有必要求助于专业昆虫工作者。如中国科学院动物研究所、中国检验检疫科学院动植物检疫研究所、上海昆虫研究所、广东昆虫研究所、检验检疫系统的昆虫专家以及相关农林院校的专家等。将成虫标本或全套标本寄去，请代为鉴定。

5.室内鉴定的依据

形态特征是昆虫分类鉴定的基础，主要利用不同种类的昆虫其身体或器官的形状、色彩及身体上胸毛或刺的数量不同来区分。20世纪60年代以来，开始利用两性成虫的外生殖器，尤其是雄性昆虫的阴茎作为主要的鉴别特征之一，使种的鉴定更趋于精确。但形态特征分类的局限性使种下分类较难。随着科学技术的发展，在昆虫分类鉴定领域内出现了不少新的方法和技术，使过去不能解决的某些昆虫近似种类的区别和种下分类问题得到了解决。但这些新方法和技术也有其局限性，并不能完全取代现有的形态特征分类，应该加强形态特征分类的研究，结合新的技术，以促进分类鉴定技术日趋完善。

6.常用检验方法

（1）染色检验某些植物或植物器官，被害虫为害，采用特殊的化学药品对供检植物样品进行染色处理，使其染上特有的颜色，有助于检出和区分病虫种类。如检查粮谷或种子中隐蔽的谷象、米象等通常采用高锰酸钾染色法和品红染色法进行检验。

①高锰酸钾染色法取净重为15g的样品，倒在铜（铁）丝网中，先浸入30℃温水内1min，再移入1％高锰酸钾溶液中浸染45～60s，取出用过氧化氢硫酸混合液（a.在1000ml水中加入相对密度为1.84的浓硫酸5.65ml，配成1％的硫酸溶液；b.在100ml水中加入过氧化氢3ml，配成3％的过氧化氢溶液；c.用100ml 1％硫酸溶液与1ml 3％过氧化氢溶液混合即成过氧化氢硫酸混合液。）漂洗掉黏附在子粒表面的颜色，倒在吸水纸上，用扩大镜检查，子粒面上有直径0.5mm左右黑点的即为虫害粒，可进行剖解鉴定虫种。

②品红染色法取净重为15g的样品，倒在铜（铁）丝网中，先浸入30℃温水内1min，再移浸于酸性品红溶液（蒸馏水950ml，加入酸性品红0.5g、冰醋酸50ml混合）浸染2～5min，取出用清水洗净，倒在吸水纸上，用扩大镜检查，虫蛀粒表面均染有0.5mm左右樱桃红小点；虫伤或机械损伤则染色浅且斑点不规则。

③碘或碘化钾染色法用于豆子中豆象的检验，取净重为15g的样品，倒在铜（铁）丝网中，浸入l％碘化钾溶液或2％酒精碘溶液中1～1.5min，取出移入0.5％氢氧化钾或氢氧化钠溶液中30s，取出用清水洗涤15～20s，镜检，豆粒表面有1～2mm直径的黑色圆斑的为虫蛀粒，剖解鉴定其种类。

（2）比重检测一般用于检验种子、粮谷、豆类中的钻蛀性害虫，其原理是有虫害的子粒比健康子粒轻，浸入一定浓度的食盐水（或糖水、泥水等其他溶液）中，有虫害的子粒漂浮在溶液表面，捞取浮物，结合解剖镜检，鉴定种类。

饱和食盐水的相对密度为1.2，对于相对密度大于1.2的豆科植物的种子，用饱和食盐水（食盐36g溶于100ml水中）或硝酸铵溶液（硝酸铵300～500g，溶于1000ml水中）浸泡1～2min，受豆象为害的子粒将漂浮上来。

对于相对密度小于1.2的禾本科植物的种子，用5％～10％的食盐水浸种即可。

7.重要检疫性害虫的检验标准简介

目前我国发布的检疫性害虫检验标准有35项，其中国标2项，行业标准33项。

GB／T18084—2000地中海实蝇检疫鉴定方法

GB／T18087—2000谷斑皮蠹检疫鉴定方法

SN／T1105—2002大家白蚁检疫鉴定方法

SN／T1120—2002苹果蠹蛾检疫鉴定方法

SN／T1125—2002欧洲大榆小蠹检疫鉴定方法

SN／T1257—2003大谷蠹的检疫鉴定方法

SN／T1264—2003墨西哥棉铃象检疫鉴定方法

SN／T1274—2003菜豆象的检疫鉴定方法

SN／T1277—2003松突圆蚧的检疫鉴定方法

SN／T1278—2003巴西豆象的检疫鉴定方法

SN／T1147—2002椰心叶甲检疫鉴定方法

SN／T1148—2002木薯单爪螨检疫鉴定方法

SN／T1149—2002椰子缢胸叶甲检疫鉴定方法

SN／T1160—2002棕榈象甲检疫鉴定方法

SN／T1178—2003马铃薯甲虫检疫鉴定方法

SN／T1389—2004美洲榆小蠹检疫鉴定方法

SN／T1383—2004苹果实蝇检疫鉴定方法

SN／T1374—2004美国白蛾检疫鉴定方法

SN／T1370—2004日本金龟子检疫鉴定方法

SN／T1366—2004葡萄根瘤蚜检疫鉴定方法

SN／T1348—2004白缘象甲检疫鉴定方法

SN／T1401—2004果核芒果象检疫鉴定方法

SN／T1402—2004果肉芒果象检疫鉴定方法

SN／T1403—2004印度果核芒果象检疫鉴定方法

SN／T1438—2004稻水象甲检疫鉴定方法

SN／T1448—2004小蔗螟检疫鉴定方法

SN／T1451—2004灰豆象检疫鉴定方法

SN／T1452—2004鹰嘴豆象检疫鉴定方法

SN／T1453—2004巴西豆象检疫鉴定方法

SN／T1483.1—2004高粱瘿蚊检疫鉴定方法

SN／T1483.2—2004黑森瘿蚊检疫鉴定方法

SN／T1349—2004山松大小蠹检疫鉴定方法

SN／T1355—2004可可褐盲蝽检疫鉴定方法

SN／T1393—2004西松大小蠹检疫鉴定方法

SN／T1397—2004非洲大蜗牛检疫鉴定方法