马铃薯茎尖脱毒复壮技术

（二）马铃薯茎尖脱毒复壮技术

利用茎尖脱毒复壮技术生产无病毒种薯，是20世纪50年代以来在马铃薯种薯生产上的一大贡献。茎尖脱毒是利用病毒在植物组织中分布不均匀性和病毒愈靠近根、茎顶端分生组织愈少的原理，而切取很小的刚分生的茎尖组织来实现，其切取的茎尖（生长点）大小常为0.2～0.3毫米，只带1～2个叶原基。概括而言，马铃薯脱毒复壮就是采用现代生物技术手段，把病毒从马铃薯植株体内除掉，使植株重新恢复到原来的健康状态，从而达到优质高产的目的。

1.茎尖脱毒方法

目前，生产中常采用的脱毒复壮方法主要是指茎尖组织培养技术来脱除病毒，主要步骤如下所述。

（1）选择优良单株

在进行茎尖组织培养之前，应于生长期间在田间选择具有本品种典型性、生育健壮、病症表现少或没有、产量高的单株用于茎尖剥离。

（2）淘汰已感染马铃薯纺锤块茎类病毒的单株

因为马铃薯纺锤块茎类病毒不能通过茎尖组织培养方法脱除掉。

（3）配制茎尖组织培养基

（4）取材和消毒

当入选的无性系通过休眠期后，可采用下列两种方法获得无菌苗：

①将块茎用自来水充分洗净后，用75%的酒精浸泡3～5秒钟，然后置于0.1%升汞溶液中灭菌10分钟，再用无菌水冲洗5次。最后将块茎切成2厘米见方小块，每块带一个芽眼，于无菌三角瓶中培养。

②将块茎于温室内催芽播种，在芽长到4～5厘米、叶片未充分展开时剪芽。剪芽过晚，生长点易出现花芽分化而影响剥离。幼苗剪下剥去外层大叶片，将所有的芽放于烧杯中，用纱布封口，用自来水冲洗半小时。控干水分，然后在无菌室内严格消毒。

（5）茎尖剥离和接种

在无菌条件下，将已消毒灭菌的幼芽置于40倍的解剖镜下。然后用解剖针剥去幼叶，露出带有叶原基的圆滑生长点，再用消过毒的无菌刀（或解剖针）切下大约0.2毫米长、带1～2个叶原基的茎尖，随即将其置于有培养基的试管中，封好试管口。

（6）培养

接种于试管中的茎尖放于培养室内培养。培养条件是，温度为25℃，光照时间为16小时/天，光照强度为2000～3000勒克斯。在正常情况下，茎尖培养30～40天就可见到其明显增长，这时可转入无生长调节剂的培养基中培养。经过4～5个月的培养，就可发育成有3～4个叶片的小植株。

2.脱毒苗检测及无毒株系鉴定

茎尖培养获得的植株，不一定就没有了病毒，必须通过病毒检测鉴定出无病毒的株系。检测方法常用的有：一是用指示植物法，二是用酶联免疫吸附法，三是用分子生物学方法，四是电镜检测法。其中，前面两种方法比较常用。

通过检测获得的无毒株系，是否保持了原来品种特性，还需作进一步鉴定，因为在茎尖培养过程中，剥离的茎尖越小越易发生变异。鉴定的简单方法是将所有的株系种植到田间进行性状观察。