液体培养基法

第一节　BACTEC液体培养基法

BACTEC液体培养基法是对传统药敏培养方法的一次较早的革新。建立于20世纪80年代的BACTEC 460TB系统，以14C标记的棕榈酸为底物，将标本前处理后接种于培养瓶内，如果有微生物存在，则分解棕榈酸，产生14CO₂，通过仪器自动显示生长指数（growth index，GI），判定有无微生物存在。如果在液体培养基中加入适当浓度的抗结核药物，接种一定量细菌，与不含药物的对照管比较14C的产生量，可以快速判断药敏试验结果。该方法可将药敏试验时间缩短至7～14天，且与常规方法结果比较符合率为95%～100%。此法常用于结核菌对RFP、INH、SM和EMB的耐药性的检测。此外，在Bactec系统内加入P-硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮（NAP）继续培养2～6天后，根据生长指数可初步鉴别结核杆菌复合群和非结核杆菌（NTM）。此方法虽比常规药敏试验法快，但从标本初代分离、药敏试验和NAP鉴定MTC和NTM，仍需21天左右。此外，需昂贵的仪器，且试剂价格较贵，易受杂菌污染，并有放射性污染，也缺少二线抗结核药的检测规程，因而不甚理想。因此，该技术虽然从20世纪90年代即引入我国，但一直难以推广，目前正被BACTEC MGIT960系统取代。

除上述所提到的BACTEC MGIT960系统外，近年来推出的分枝杆菌自动化检测系统还有美国BD公司开发的BACTEC 9000MB系统、阿克苏公司开发的Bact／Alert系统和DIFCO公司开发的ESPⅡ培养系统。BACTEC 9000MB系统是利用氧特异性的感应器来监测分枝杆菌生长过程中浓度的变化。 Bact/Alert系统是利用颜色感应器来监测分枝杆菌生长过程中释放的CO₂，随着CO₂浓度的升高，培养基中H^＋浓度也逐渐升高，从而使感应器的颜色由墨绿色变为金黄色。EPSⅡ是利用压力感应器监测密封培养瓶中气体压力的变化来反映细菌生长情况。

上述技术的共同点是均利用液体培养基，通过自动化检测仪器来完成标本初代分离、药敏试验和分枝杆菌菌种的初步鉴定。但不足之处是所用仪器价格昂贵，需专门进口厂家的专利液体培养基，费用较高，且方法仍然建立在以细菌培养的基础之上，都要通过分枝杆菌的自然生长以积累菌量方能检出。而分枝杆菌的生长相对缓慢，因而它们都难以突破“慢”的限制。