羟基磷灰石溶解度检测方法

1　材料与方法

1. 1　载银硅羟基磷灰石涂层钛片的制备

先将Ca（NO³）²·4H²O和P²0⁵分别缓慢溶于无水乙醇，形成Ca和P溶胶。以10：3的摩尔比将Ca（NO³）²溶胶缓慢倒入P²0⁵溶胶，使钙磷的原子比为5∶3，同时放入适量乙二醇乙醚，磁力搅拌机震荡搅拌30min，陈化24h后形成羟基磷灰石（HAP）溶胶。将正硅酸乙酯（Si（OCH²CH³）⁴，TEOS）溶液加入羟基磷灰石溶胶中，混合搅拌均匀形成硅羟基磷灰石溶胶（Si-HAP）。将硝酸银与柠檬酸以40∶1的质量比混合后，加入去离子水形成Ag⁺溶液。将Ag⁺溶液按照一定比例倒入硅羟基磷灰石溶胶中，搅拌均匀，放入60°C水浴箱中陈化24h，最终形成Ag⁺质量分数分别为1.6％，0.8％，0.4％，0.2％，0.1％，0.05％的载银硅羟基磷灰石（Ag-Si-HAP）溶胶。

制备厚度为1mm，面积为1cm×1cm的方形钛片，表面用不同型号的砂纸逐级打磨粗糙，超声清洗烘干。将钛片放入不同浓度的Ag-Si-HAP溶胶以及不含有银离子的Si-HAP溶胶中浸泡5min，以3cm/min的速率提拉，在空气中自然干燥后，放入120°C烘箱烘干10min。此过程重复3次后，放入高温烧烤炉中烧结。制得钛表面载银羟基磷灰石涂层。

1.2　载银硅羟基磷灰石涂层钛片抑菌实验

配置变异链球菌、远缘链球菌、粘性放线菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、牙龈卟啉单胞菌菌悬液，稀释至浓度1×10⁶ CFU/mL，确定其为纯培养。用微量加样器吸取上述配置的菌液50μL分别点在不同Ag⁺浓度的钛片上，表面覆盖面积为1cm×1cm的盖玻片，使菌液在钛片表面均匀分布无气泡。培养箱中培养24h。加入PBS溶液2mL钛片上菌液，振荡器上轻微震荡10min，形成均匀菌悬液。吸取各孔中菌悬液50μL至EP管，用螺旋接种仪接种在培养基表面。放置入培养箱中培养24h。挑取菌落涂片染色，在光镜下观察为纯培养。

全自动菌落计数仪辅助计算各培养皿菌落数，排除无效区域，记录实验结果，换算为细菌浓度。为保证本实验的可靠性，整个实验过程重复3次，实验结果取平均值，计算不同浓度的材料对每种细菌的抑菌率。

抑菌率=空白对照组菌落数−实验组菌落数/对照组菌落数×100％

1.3　扫描电镜观察钛涂层表面形貌及细菌附着情况。

将浓度为1×10⁶ CFU/mL的变形链球菌、金黄色葡萄球菌、粘性放线菌、白色念珠菌菌悬液滴在Ag⁺质量分数为1.6％的Ag-Si-HAP涂层的钛片上，培养箱中培养24h。2.5％的戊二醛固定样本4h后，用PBS缓冲液冲洗。然后依次用体积分数为30％，50％，70％，90％，100％的乙醇溶液进行梯度脱水各15min。再用乙酸异戊酯溶液做置换处理后进行临界点干燥，最后喷金用扫面电镜观察涂层材料表面形貌及细菌形态。