分子诊断技术

通过从分子水平上完成DNA、RNA或蛋白质检测,从而对疾病作出诊断的方法。目前常用的有基因诊断和肿瘤标记物检测。

1.基因诊断 用分子生物学的理论和技术,通过直接探查基因的存在状态或缺陷,从基因结构、定位、复制、转录或翻译水平分析基因的功能,从而对人体状态与疾病作出诊断的方法。基因诊断不仅能对某些疾病作出确切的诊断,如确定某些遗传病,也能确定基因与疾病有关联的状态,如对疾病的易感性、发病类型和阶段的确定等。基因诊断的主要技术有核酸分子杂交(原位杂交、Southern杂交、Northern杂交、斑点杂交等)、PCR、基因测序和生物芯片技术。

2.肿瘤标记物检测 指肿瘤细胞和组织由于相关基因或异常结构的相关基因的表达所产生的蛋白质和生物活性物质,在正常组织中不产生或产量甚微,而在肿瘤病人组织、体液和排泄物中可检测到。此外,在病人机体中,由于肿瘤组织浸润正常组织,引起机体免疫功能和代谢异常,产生一些生物活性物质和因子,虽然这些物质和因子特异性低,但与肿瘤的发生和发展有关,也可用于肿瘤辅助诊断。肿瘤标记物分别有:原位性肿瘤相关物质、异位性肿瘤相关物质、胎盘和胎儿性肿瘤相关物质、病毒性肿瘤相关物质,癌基因、抑癌基因及其产物等。肿瘤标记物测定方法包括:流式细胞术、Western Blot和组织芯片等。

3.激光微切割 激光显微切割技术是快速可靠的从组织切片的特定显微区域获取纯的单个或多个细胞的有力工具,可应用于不同的分子分析技术中。该技术在获取细胞的同时,既可以保留细胞和组织的形态,又可以保持DNA、RNA和蛋白质的完整性。

细胞可以从冰冻、石蜡或塑料包埋的组织切片、血涂片及细胞培养(活的或者固定的)中获取。组织切片可以是未染色的或用改良的苏木素和伊红(HE)染色的。其他的染色方法可包括用荧光剂或显色剂的免疫组织化学(IHC)、原位荧光杂交技术,这些可根据后续要做的检测来选择。

激光显微切割、激光捕获显微切割以及激光电压弹射操纵显微切割这些术语的命名与获取细胞时使用的仪器有关,每种仪器有其特有的细胞获取方法。一些仪器的系统是激光移动代替镜台移动,另一些是组织切片/细胞被黏附到膜上以用来切取。这些方法的特征是:切取的细胞如何从玻片上或从培养皿里转移到收集容器中。

激光显微切割技术的一个主要优点是能够获取纯的细胞来做分子学分析。来自纯细胞的资料意味着比来自含有异源性细胞的同源组织更加特异(Curran et al,2000);另外的优点还包括最大限度减少标本丢失,提供对标本进行不同染色和准备程序的机会。