单核细胞计数

【原理】　在酸性条件下，单核细胞内的特异性酯酶可将α-醋酸萘酯水解，产生α-萘酚，并与六偶氮副品红结合成稳定的红色化合物，沉积于单核细胞内，可与其他白细胞区别。因此，将血液稀释一定倍数，滴入计数盘，计数一定范围内单核细胞数，即可求得每升血液中单核细胞数。

【试剂和器材】

1.六偶氮副品红液副品红0.2g，加入2mol/L盐酸2ml，加热溶解。溶解后置冰水中冷却，边摇边加10%亚硝酸钠溶液2ml，呈淡黄色透明溶液。

2.缓冲稀释液10%tween 80ml，0.1mol/L磷酸氢二钾溶液20ml，10%甲醛溶液5ml，50g/L皂素生理盐水溶液5ml，0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 5.9）50ml（磷酸氢二钠溶液1份、磷酸二氢钾溶液9份）相加混匀。

3.320g/Lα-醋酸萘酯-双甘醇液α-醋酸萘酯0.5g，加双甘醇（一缩二乙二醇）25ml，加热溶解。

4.应用液取缓冲稀释液16.2ml于三角烧瓶中，边摇边加入六偶氮副品红液0.4ml，混匀后边摇边加入20g/Lα-醋酸萘酯-双甘醇液0.4ml，配制成单核细胞应用液。如有沉淀需过滤。

其中α-醋酸萘酯为非特异性酯酶底物，六偶氮副品红为重氮染料，可与α-醋酸萘酚偶合沉淀于单核细胞中。磷酸盐缓冲液可防止结晶，增强溶解稳定性。皂素为溶血剂，并可使单核细胞非特异性酯酶抑制剂灭活。

5.Neubauer细胞计数盘。

【操作方法】

1.取小试管1支，加入单核细胞应用液180μl，取末梢血20μl，加入其中混匀，使血液稀释10倍。加塞静置染色25min。

2.滴入两个Neubauer细胞计数盘中。

3.静置数分钟，待细胞下沉后，于高倍或低倍镜下，计数全部方格内单核细胞数（N）。

在本稀释液中，单核细胞染红色或红棕色。嗜酸性粒细胞可呈淡粉红色，其他细胞不显色。

计算：

单核细胞数/L＝N×5×106/L＝N/1 000×5×109/L

【正常参考值】　（0.12～0.7）×109/L。

【临床意义】　增多常见于伤寒、疟疾、黑热病、活动性结核、单核细胞性白血病、某些病毒感染。

【注意事项】

1.六偶氮副品红液应新鲜配制，放置3h后染色力逐渐下降。

2.室温过低，染色时间应适当延长或置37℃温箱保温。