血细胞的计数

实验一　血细胞的计数

一、实验目的

学习人工计数人体单位血液内红细胞、白细胞和血小板的方法。

二、实验原理

血液中血细胞数量众多，难以直接计数，因此需采用适当溶液将血液稀释后，置于血细胞计数板的计数室内，在显微镜下计数一定容积血液稀释液中的血细胞个数，然后用所得数据推算每立方毫米或每升血液中的各种细胞个数。

目前，临床上使用“血液多参数自动测量仪”可使血细胞计数工作完全自动化。

三、实验对象

人。

四、实验器材

血细胞计数板、定量毛细吸血管（10mm³、20mm³）、75%酒精棉球、擦镜纸、采血针、移液管（1mL、2mL、5mL）、小试管、显微镜等。

五、实验药品

95%乙醇、乙醚、蒸馏水、红细胞稀释液、白细胞稀释液、血小板稀释液等。

六、实验步骤和观察项目

1.仪器洗涤

实验前，应先将血细胞计数板、盖玻片、吸血管洗净备用。仪器在洗涤时应用自来水和蒸馏水相继清洗，洗净后用擦镜纸小心拭干。吸血管内存留的水分可用95%的乙醇吸入去除，最后再吸入乙醚1～2次以除去乙醇。

2.采血及稀释

用5mL移液管吸取3.98mL红细胞稀释液并注入准备好的干燥小试管内，再用1mL移液管吸取0.38mL白细胞稀释液注入另一干燥小试管内，最后用2mL移液管吸取2mL血小板稀释液注入第三支干燥小试管内备用。

用人血液进行实验时，可采用耳垂或无名指端的毛细血管血液。先用75%的酒精棉球消毒采血部位，再使用采血针快速刺入皮肤，出血后的第一滴血用干棉球拭去，之后流出的血液形成血滴时，使用吸血管分别三次准确吸取血液20mm³、20mm³、10mm³，依次将其内的血液吹入盛有红细胞稀释液、白细胞稀释液、血小板稀释液的三支试管内，轻轻摇动试管，将血液和稀释液充分混合。

该实验也可使用家兔血液进行操作，可采集家兔耳缘静脉的血液，操作方法与上述类似。

3.血细胞计数板的使用

（1）熟悉血细胞计数板 血细胞计数板是一块特制的长方形厚玻片（图3－1－1），在板面中部有4条直槽，内侧两条直槽中间有一横槽，横槽将计数板的中部分隔成两个结构相同的长方形计数室（图3－1－2）。每个计数室被精确划分成9大方格，方格面比整个玻璃板平面低0.1mm，因此，放上盖玻片后，盖玻片与其间距即计数室的高为0.1 mm，每大格边长为1mm、面积1mm²、体积为0.1mm³。计数室四角的4个大方格又各被划分成16个中方格，一般用作白细胞计数。中央的大方格被划分成25个中方格，每个中方格边长0.2mm、面积0.04mm²、体积为0.004mm³。每个中方格又被分成16个小方格，一般将中央大方格的四角和中心共5个中方格用作红细胞或血小板计数。

图3－1－1　计数板结构

图3－1－2　血细胞计数室的分格

（2）充液 取盖玻片平放于计数板中央，用滴管吸取少量已稀释混匀的血细胞悬液，于计数室与盖玻片交界处一次性滴入计数室内，液体可自动均匀地渗入计数室，充满为宜（图3－1－3）。静置2～3min，待血细胞下沉后，于显微镜下进行计数。计数血小板时，悬液应静置15min。

图3－1－3　计数室充液法

4.计数

先用低倍镜巡视计数室内的血细胞分布是否均匀，若分布不均则需抛弃，分布均匀方可计数。

（1）红细胞计数 在低倍镜下找到大方格，然后换用高倍镜观察中央大方格四角和正中的5个中方格，计数其内的红细胞总数。计数时须按照一定的方向顺序逐格计数，对于压边的细胞一般“数上不数下，数左不数右”。

（2）白细胞计数 在低倍镜下计数四角4个大方格中的白细胞总数。计数原则同红细胞。

（3）血小板计数 血小板的计数方法同红细胞，调暗视野有助于看清血小板的折光。由于血小板在高倍镜下呈圆形、椭圆形或形态不规则的折光小体分布于大量红细胞之间，因此计数时应注意与细胞碎片、杂质区别开。

5.计算

（1）红细胞数 5个中方格的红细胞总数×10 000＝1mm³血液中的红细胞数量。

（2）白细胞数 4个大方格的白细胞总数×50＝1mm³血液中的白细胞数量。

（3）血小板数 5个中方格的血小板总数×10 000＝1mm³血液中的血小板数量。

七、注意事项

1.采血部位须健康清洁，如有炎症或溃烂则不能采血。

2.血液加入试管须充分摇匀，但不可太用力，避免气泡，防止血细胞（尤其血小板）破坏。

3.计数血小板时，计数板应静置15min以上，待血小板完全下沉后再计数。

4.计数红细胞时，若各中方格内的红细胞数目相差20个以上，或在计数白细胞时，各大方格内的白细胞数目相差8个以上，则表示血细胞分布不均匀，须将稀释液摇匀后再重新计数。

八、思考题

1.对比同组同学的测定结果，分析本实验中可能影响计数的因素有哪些？

2.了解各类稀释液成分，试分析各成分的作用如何？