流式细胞仪的基本结构和工作原理

（一）基本结构

1.流动室和液流系统 流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，是仪器的核心部件，被测样品在此与激光相交。流动室内充满鞘液将样品流包裹，使被检测细胞被限制在液流的轴线上。鞘液以及细胞流的流动通过加正压的方法实现，并可以根据需要控制液流的速度获得最佳的检测结果。

2.激光光源和光学系统 经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。目前的流式细胞仪大多采用氩离子激光器。光学系统由多组滤光片、透镜等光学元件组成，保证激光光束准确的会聚于细胞流上。

3.信号检测系统 荧光染色的细胞在对应波长激光的激发下产生的荧光信号要通过光电转换器转换成电信号以进行检测。这一过程通过光电倍增管（PMT）来实现，从PMT输出的电信号仍然较弱，需要经过放大后才能输入分析仪器。放大器一般分为线性放大器和对数放大器。

4.计算机分析系统 经放大后的电信号被送往计算机分析器。计算机的存储容量较大，可存储同一细胞的6～8个参数。存储于计算机内的数据可以在实测后脱机重现，进行数据处理和分析，最后给出结果。

5.细胞分选系统 在某些流式细胞仪上还配有细胞分选系统，可用来分离具有特定特点的细胞进行进一步研究。

（二）工作原理

1.基本原理 待测细胞被制成单细胞悬液，经特异性荧光染料染色后装进样品管，在清洁气体的压力下进入流动室。在流动室内，细胞在鞘液的包裹和约束下形成单列在鞘液的包围下由喷嘴中心喷出，成为细胞液柱。液柱与入射的聚焦激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生特异性荧光，这一荧光信号入射至测量系统，经过PMT转换和放大后，成为电信号最终在终端计算机中得以体现，进行测量。

2.细胞分选原理 液滴形成信号的频率约为30kHZ，此信号加在压电晶体上使之产生同频率的机械震动，流动室也就随之振动，使液柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成速度可达每秒30 000个。这样细胞就被包裹在部分液滴中，细胞的性质是在进入液滴以前就已经测定了的，如果其特性与被选定要进行分选的细胞特性相符，则仪器给这个被选定的细胞刚形成液滴时就加正或负的电荷，未被选定的细胞形成的液滴及不包含细胞的空白液滴不带有电荷。带有电荷的液滴落入偏转板的高压静电场时根据所带电荷的正、负而向左、右偏转，落入指定的收集器中，实现目标细胞从群体中分离的目的。