硅藻样品分析

1．样品的采集和沉积硅藻分离

沉积物样品采集按《海洋调查规范》（GB／T 13909—92）的要求进行，表层沉积物的采样方法多为抓斗取样，部分为箱式采样器取样，柱状沉积物为重力活塞取样。

首先要对沉积物样品进行沉积硅藻的分离，沉积硅藻的分离方法有很多，目的是把沉积物中的硅藻细胞完好、全部地分离出来，只要能保证把沉积物中的硅藻细胞干净、经济地分离出来，就是好方法。以往的方法大都使用镉重液悬浮将硅藻和黏土矿物等分离。用稀盐酸除钙质，双氧水去有机质。Lapointe（2000）的方法不使用重液分离，先使用10％的HCl，除去碳酸钙，再使用30％的H2O2氧化有机物，最后用10μm的网筛过滤以除去黏土。笔者在Lapointe的方法上又做了改进，直接用15μm的网筛过滤以除去黏土矿物等细颗粒物质，在此之前对15μm的网筛滤下的部分进行镜检，观察结果显示滤下的只有少量破碎的硅藻壳体，因此采用这种方法不会影响到硅藻的丰度变化。具体分离步骤如下：

（1）取10g左右沉积物样品在105℃的烘干箱烘干恒重。

（2）将烘干样品放入高皿容器或50ml小烧杯中，加满蒸馏水浸泡24h。

（3）用100～120Hz进行超声波分散。

（4）用15μm的网筛过滤，过滤时要用蒸馏水冲洗。

（5）把网筛上的材料放入10ml试管内，加入几滴稀盐酸。

（6）水洗多次，分离完成，准备制片。

2．硅藻样品的制片

（1）将18mm×18mm盖玻片放在稀硫酸中煮30min，用蒸馏水冲洗，放入酒精中浸泡1周，载玻片也要放入酒精中浸泡1周，制片时把载玻片和盖玻片用绸布擦干，备用。

（2）取干净的盖玻片放在纸板上，视浓度大小，吸取20μl或40μl材料均匀涂在盖玻片上，晾干去水。

（3）将涂有材料的盖玻片放在酒精灯上烘干，滴一滴加拿大树胶（2份加拿大树胶∶1份二甲苯）在盖玻片上，取一块载玻片放在酒精灯上烘干，轻盖在有加拿大树胶的盖玻片上，反转，贴上标签，制成永久玻片，每个样品制片3张。制片完成，放于标本盒中用于镜检。

3．硅藻鉴定和统计

（1）鉴定和统计：将制好的永久玻片硅藻在Olympus BX51光学显微镜下观察，鉴定使用的放大倍数为物镜40×、目镜20×。对于每个样品统计硅藻的壳体数量目前国际上尚无统一规定。笔者采用同行学者通常的做法，每个样品鉴定和统计硅藻300壳左右（Lapointe，2000；Jiang，2001），不足者以统计3张标准片为准。对于壳体不完整的个体，中心纲硅藻以一半完整，羽纹纲硅藻以壳缝一侧完整（Lopes，2006）参与记数。为了提高统计的准确性，每个样品进行随机行数观察（Lapointe，2000）。尽量鉴定到种，否则鉴定到属。在鉴定过程中，特别要注意反映环境变化的指示种的变化。

（2）绝对丰度及相对丰度的计算：绝对丰度为每克沉积物硅藻个数，计算公式为：

绝对丰度（壳／g）No Valves／g＝［（N×（S／s））×（V／v）］×1 000／W

式中：N为观察硅藻的壳体数；S为样品总行数；s为观察行数；V为总体积；v为盖玻片滴溶液的体积；W为样品干重。相对丰度为各种藻在每个样品中各种硅藻的百分含量（Abrantes et al．，2007）。

硅藻的分类鉴定主要参考金德祥等（1965、1982、1991）、蓝东兆等（1995）、程兆第等（1993）、郭玉洁和钱树本（2003）、Schmidt（1927）、Grethe（1960）、Hustedt（1930）、Jousé （1977）、Mann（1907）、Mann（1925）、Van Heurck（1896）和Round et al．（1990）等硅藻书籍。

4．扫描电镜样品的材料处理和观察

扫描电镜的材料处理根据《中国湖相化石硅藻图集》（黄成彦，1998）的方法，首先将18mm ×18mm盖玻片放在稀硫酸中煮30min，用蒸馏水冲洗，放入酒精中浸泡1周，制片时把盖玻片擦干。然后视样品浓度用滴管在每片盖玻片上滴2～3滴蒸馏水，再用细玻璃棒将样品和蒸馏水充分搅匀，使用自然干燥，干燥后对载有硅藻样品的盖玻片进行光镜下预选，对硅藻壳面清晰、干净、分布均匀的标本在扫描电镜样品台上进行喷镀，镀金25～30sec，最后将喷镀好的样品放入扫描电镜样品室内进行观察。