样品的处理

第二节　样品的处理

一、病毒检验样品的处理

1.器官组织病料　将保存于50%甘油缓冲盐水溶液中的器官组织病料用无菌生理盐水洗2～3次后，细细剪碎后放入乳钵中充分研磨。研磨过程中，逐渐加入pH7.2～7.4的Hank’s液（含500IU/ml的青、链霉素），最后制成10%～20%的组织悬液。置于－20℃环境迅速冷冻，然后于37℃水浴中立即融化，冻融过程可以反复几次，使细胞内的病毒充分释放。以2000r/ min离心10～20min后，吸取上清液，作接种用。

2.鼻咽拭子或直肠拭子　将棉拭子迅速置于含有2～5ml中性Hank’s平衡盐溶液（含500IU/mL的青、链霉素）的小瓶中，充分挤压，刷洗棉拭子。必要时可反复冻融3～5次，收集其液体部分，以2000r/min离心10～ 20min，吸取上清液，作接种用。

3.血液样品　用作病毒分离的血液样品，可以是全血也可以是血清，要根据病毒的感染类型而定。采集全血时可加入肝素或枸橼酸钠作为抗凝剂。

4.分泌物或渗出物　将采集的分泌物或渗出物用pH7.2～7.4的Hank’s液作3.5倍稀释。这类样品常含有大量细菌，需做除菌处理，可加入青、链霉素各1000～2000IU/ml，4℃4h或过夜，2000r/min离心20min，吸收上清液，用于接种。病料悬液也可经离心去沉渣后，用细菌滤器过滤除菌，滤过液用于接种。

5.粪便　病毒在粪便中的含量较少，所以一般取5～10g以上的新鲜粪便，或直接从肠管内取样。用pH7.2～7.4的Hank’s液将粪便稀释10～20倍，Hank’s液应含有1000～2000IU/ml的青、链霉素和2.5μg/mL的两性霉素B或40μg/ml的制霉菌素，4℃过夜，2000r/min离心20min，取上清液用于接种。

6.无菌的体液　胸水、脑脊液、心包液和无菌导尿液等可不做任何处理，直接用于接种。

二、细菌检验样品的处理

1.用于细菌分离培养病料的处理　严格无菌采取的待检病料，可不经处理直接接种于培养基中进行分离。对于污染较严重的病料，在接种培养基前，必须根据污染杂菌的程度及性质进行适当处理，然后进行分离培养。

2.加热处理法　当怀疑病料中的病原微生物为芽孢菌时，可将待检组织加灭菌生理盐水研磨（液体待检病料则不必）作成1∶5～1∶10倍的稀释液，置75℃水浴箱中，加热30min，或80℃经15～20min，以杀死微生物和繁殖体（包括杂菌及病原菌），而细菌芽孢仍存活，然后将处理过的待检病料接种到适当的培养基上，即可获得纯培养。

3.接种易感动物　把待检病料接种易感动物，待其发病死亡后，取其血液或组织器官材料，接种到培养基上。利用这种方法不但可以从污染的病料中分离出病原菌，而且还可以确定病原菌的致病性和毒力。

4.化学药品处理　有些化学药品对某些微生物有极强的抑制力，而对另一些微生物则没有抑制作用或作用很小。因此，可将适宜的化学药品加入培养基中分离微生物。如培养基中加入一定量的龙胆紫则可抑制许多革兰氏阳性菌的繁殖，有利于阴性菌的分离培养。用50%的酒精或0.1%升汞水溶液处理真菌性病料几分钟，再用灭菌水洗涤，就可杀死部分污染的杂菌。

三、用于动物试验样品的处理

1.胸水、脑脊液、血液、心包液、尿液和分泌物等可不做任何处理，直接接种动物。

2.脏器等组织取被检病料放于无菌研钵中，用灭菌的剪子将组织剪成碎粒。加入灭菌海沙少许再进行磨细，再加入生理盐水少许继续研磨，静置片刻，使悬浮组织下沉，然后用注射器吸取上清液供注射用。如供静脉注射用，常用低速（1700r/min）离心15min，再吸取上清液作注射用。

3.细菌培养物液体培养物可直接用于注射。固体培养物先用生理盐水或肉汤培养基洗刮菌苔，然后倾于小烧杯中吸取。注意悬液制成后存放时间不能过长。