转基因的构建

一、转基因的构建

在设计转基因程序时，应该考虑目的基因是否能够转移到特异的动物组织或细胞，并实现在其中的表达。大量实验结果显示，外源基因在染色体上的整合及整合位置通常会影响到转基因的表达方式和表达水平。转基因载体的构建通常包括：

编码区：在mRNA的成熟过程中，外显子形成先导区、可阅读框架和成熟mRNA的随尾序列，是所有基因工程关注的核心——目的基因部分，可以是外显子和内含子混合组成，也可以是cDNA或人工基因，最终转录产生成熟mRNA作为蛋白质合成的模板。大量实验研究表明，目的基因含有内含子序列或转基因为基因组DNA时，可以有效促进表达和提高转基因的表达水平。

启动子：位于结构基因5′上游的一段DNA序列，包含RNA聚合酶结合位点，可以准确控制目的基因转录的开始位点和方向。启动子还包括转录起始位点的上游调控区和编码区邻近的顺式控制元件。启动子的选择通常有2种方法，一是去除目的基因的天然启动子，选择合适的强启动子序列与目的基因构成重组基因，常被选择的强启动子包括SV40启动子、CMV启动子、溶菌酶基因启动子等。另一种是使用目的基因的天然启动子，根据研究需要构建一系列不同的表达载体，目前研究较多的是输卵管卵清蛋白基因启动子，同时它又是输卵管组织特异性启动子。研究和使用较多的启动子还有乳球蛋白基因启动子、酪蛋白基因启动子、乳清酸蛋白基因启动子等。对于组织特异性表达的转基因动物来说（尤其是转基因动物生物反应器），组织特异性表达启动子的使用是确保转基因成功的关键。

还可以选择一些增强子元件如核基质结合区（MARs）、5′或3′侧翼区存在的转座控制区序列等，以提高转基因的整合效率及转基因的表达效果。

当然，转基因重组子的构建通常还包含终止序列、抗性选择基因、载体复制起始子等部分。基因的构建和克隆是转基因动物能否成功的关键一步，在重组子构建完成后，一般在基因导入前，须在动物细胞进行体外试验，以证明载体活动的可行性。