转基因诱导细胞实验

解放军总医院耳鼻咽喉研究所与美国基因公司合作研究，通过转染Hath1基因诱导大鼠耳蜗大上皮嵴细胞（greater epithelial ridge，GER）和小上皮嵴细胞（lesser epithelial ridge，LER）分化为毛细胞样细胞。方法是取出生后第1天的大鼠耳蜗，利用机械分离和酶消化相结合的方法分别分离出纯的GER和LER细胞，利用ad－Hath1－EGFP感染细胞，然后将感染后1，3，7，10和12d的细胞进行myosin免疫组化染色，结果发现一部分感染的GER细胞变成了myosinⅦa阳性，并且从ad－Hath1感染后3d即出现毛细胞的分化（表达毛细胞标记物）（见书末彩图27－1），相当数量的ad－Hath1－EGFP感染的细胞表达报道基因EGFP，其中有部分细胞在感染后10d表现为myosinⅦa和EGFP的双标记。而ad－EGFP感染后3～12d的GER培养物中未见myosinⅦa阳性细胞，这提示Hath1的表达可促进GER细胞向毛细胞的分化。

同样，结果是LER在转染Hath1　3h后再培养3d后做免疫组织化学染色，可见LER细胞myosinⅦa染色阳性（见书末彩图27－2），表达毛细胞特异标记物，表明小上皮嵴细胞变为毛细胞样细胞，而未转染Hath1 的LER则无myosinⅦa染色。结论是GER 和LER细胞作为毛细胞前体细胞可以实现体外培养，转染Hath1后，可分化为毛细胞样细胞。本研究为“GER和LER细胞具有分化为毛细胞的潜能”这一观点提供了进一步的证据。分离和培养GER和LER细胞的方法可能提供一个哺乳动物内耳毛细胞分化/再生的基因表达模式和机制研究的有用的工具。特别是理解纯的GER和LER细胞的增殖和分化可能为耳蜗内、外毛细胞分化和替代方面的研究开辟新的思路，这些研究最终将有助于治疗由于毛细胞损伤引起的听觉、平衡觉障碍。