循环免疫复合物的检测技术

一、循环免疫复合物的检测技术

CIC的检测方法有几十种，但一般按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学特性的改变而设计。

（一）聚乙二醇（PEG）沉淀比浊技术

【原理】

浓度为2％～4％，相对分子质量6000～8000的PEG，是一种不带电荷的直链多糖，有强脱水作用，能选择性的沉淀大分子IC，而不能沉淀正常球蛋白，沉淀的IC可用放射免疫法或用分光光度计测定其含量。

【试剂与器材】

（1）0.1 mol/L 8.4硼酸盐缓冲液（BB）　硼砂（Na₂B₄O₇·10H₂O）4.29 g，硼酸H₃BO₃3.4 g，蒸馏水加至1000 mL，溶后用G3或G4号玻璃滤器过滤。

（2）PEG-NaF稀释液　PEG 6000 40.9 g，NaF 10.0 g，BB加至1000 mL，溶后用G3或G4号玻璃滤器过滤。

（3）热聚合人IgG　将人IgG（10 mg/mL）置63℃加热20 min后立即冰浴至冷。用时以不含CIC的正常人血清配成不同浓度。

（4）分光光度计、温箱、移液管、G3或G4号玻璃滤器等。

【操作方法】

（1）取被检血清0.15 mL，加0.1 mol/L硼酸盐缓冲液0.3 mL（1∶3稀释）。

（2）按表7-3所示，加入各液（待检血清最终稀释倍数为1∶33，PEG最终浓度为36.4 g/L）。

表7-3　PEG法测CIC的操作步骤

（3）热聚合人IgG（120.0、60.0、30.0、15.0、7.5μg/mL）按测试管操作。

（4）用分光光度计在波长495 nm处读取吸光度。

【结果判断】

（1）定性试验　待测血清浊度值=（测定管吸光度-对照管吸光度）×100。以大于正常人浊度值均值加2个标准差为CIC阳性。

（2）定量试验　以热聚合人IgG浓度为横坐标，相应的吸光度值为纵坐标，制备标准曲线。待测血清中的CIC浓度可从标准曲线得出。

【注意事项】

（1）低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹取血。

（2）高γ球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性。

（3）此法快速、简便，但特异性差，仅适于筛查。

【临床应用】

PEG沉淀法是目前最普及而且简单的方法，敏感度达20 mg/L HAHG，但易受多种大分子蛋白质的干扰，因而特异性差。该法也可用做IC测定，供分析特异性IC中的抗原或抗体。

（二）ELISA检测技术

该法所测为能结合补体第一成分片段（C1q）的IgG类抗体与其特异抗原形成的CIC。将聚苯乙烯反应板微孔包被上C1q，使形成固相，加入待测血清后，CIC中的IgG以其Fc段与C1q结合，洗涤后加入酶标记的抗-人IgG抗体，在固相上反应生成C1q-CIC-酶标记的抗人IgG复合物，洗去未结合物后，加入酶底物/色原溶液呈色，呈色强度反映待测血清中的CIC水平。此法灵敏度优于PEG沉淀比浊法，可达0.1μg/mL热聚合IgG。