嗜肺军团菌抗体测定

1976年在美国费城退伍军人集会时暴发了一种不明原因的急性呼吸道疾病。其临床表现多种多样，主要症状为发热、寒战、咳嗽、胸痛及呼吸困难等。后经分离的致病菌在1978年由WHO正式命名为军团菌（legionella）。军团菌可引起肺炎型和非肺炎型感染，肺炎型主要由嗜肺军团菌（legionella pneumophila，LP）感染所致。其易于侵犯慢性消耗性疾病及免疫功能低下患者。该菌通过空气传播，具有高度暴发性，是医院内感染的主要病原菌之一。军团菌在世界各地均有发病，我国自1982年首次发现一例报道后，相继有众多省市有军团菌发生的报道。

军团菌属为细小革兰阴性杆菌，无芽孢，无荚膜，有鞭毛，专性需氧，生长需要半胱氨酸和铁，最适pH为6．9～7．0，2%～5% CO2能促进部分菌株的生长，生长缓慢。不利用糖类，不还原硝酸盐，氧化酶实验阴性或弱阳性，脲酶阴性。军团菌属有41个种，61个血清型。嗜肺军团菌有14个血清型。多数军团菌肺炎（80%～85%）是由第1～6种血清型嗜肺军团菌引起的。

军团菌在环境中自然存在，在温水和温暖潮湿的地方可迅速繁殖。它们通常存在于湖泊、河流、小溪、温泉及其他水域中，特别是医院、酒店等的供水系统及空调的冷却系统等。其在自然界中抵抗力很强，在水中存活率很高，也曾证明军团菌污染的环境1年后自来水中仍有活菌。在医院感染中易感的宿主包括近期手术、器官移植、长期接受激素及放化疗、插管机械通气、使用鼻胃管、呼吸机等设备的患者。军团病是一种以肺部感染为主的全身性疾病，其潜伏期为2～10d。临床类型目前至少有肺炎型与庞蒂阿克热型。最初症状为发热、厌食、头痛、倦怠、昏睡和大汗淋漓。有些病人还可呈现肌痛、腹泻和精神错乱。半数以上病人体温可超过40℃。军团病不及时治疗，通常在第1周期间恶化，病死率可达10%以上。军团病最常见的并发症是呼吸衰竭、休克以及急性肾衰竭和多器官功能衰竭。目前，临床上对嗜肺军团菌的治疗仍然以红霉素为主。体外药敏试验证明多种抗生素对军团菌都有效，如多西环素、庆大霉素、氯霉素、利福平及红霉素等。

军团菌传统的检测方法有：直接荧光抗体染色检测标本中的抗原；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测军团菌可溶性抗原；PCR及其相关检测法；分离培养方法等。以上检测方法操作烦琐、费时，方法学存在一定局限性，敏感性不高。特别是分离培养时，军团菌对营养要求十分苛刻，培养需要时间较长，不能满足临床的需求，给临床诊断和治疗带来极大的不便。POCT的金标法则弥补了以上的不足，可以快速出结果，对嗜肺军团菌的快速确诊治疗、控制减少军团菌的暴发流行有十分重要的意义。

【检测原理】　基于胶体金免疫层析原理，反应标本流动方向为横向层析流动，加样后，样品向吸水垫方向流动，途经载有固相胶体金标记抗体膜后，将金标记物完全复融，继续向前流动至硝酸纤维素膜条上，固定于有捕捉抗原的抗体线处，当结果为阳性时，金标记抗体-抗原复合物上就会形成金标记抗体-抗原-固相抗体复合物，呈现红色阳性条带。如样品中无抗原，则不被捕获，就不显色，结果为阴性。多余的游离金标记抗体继续前移至固定有抗金标记抗体二抗处，被固定呈现红色的阴性对照。

【适应证】　协助诊断嗜肺军团菌感染。本试验主要用于人血清中嗜肺军团菌1～7抗体的快速定性筛选试验。

【标本采集】

1．采集新鲜血清或血浆标本。

2．标本不能立即使用，应放2～8℃冰箱保存，超过3d应放-20℃冰箱保存，使用时应提前从冰箱取出，平衡至室温。注意不要反复冻融。

【参考范围】　阴性。

【操作方法】

1．从铝箔袋中取出检测卡，平放于干燥的台面上。

2．取新鲜血清或血浆，用滴管或加样器垂直滴入2～3滴或80～120μl于检测板的样品S孔内。

3．10min内判断结果，20min后判断结果无效。注意：阳性结果最早1～2min即可出现，但阴性结果必须等到10min才可判断。

【结果判读】

1．阴性　在实验卡上只在质控区内（C）见到粉红色条带，说明实验操作可行，军团菌抗体检测结果为阴性。

2．阳性　如果在实验卡的质控区（C）和实验区（T）分别出现两条清晰的粉红色条带，说明军团菌（LP）抗体检测结果为阳性。条带之间的颜色差异不影响结果解释。

3．不确定结果　如果在实验卡的质控区内没有出现条带，不论实验区是否有条带，该结果应视为无效。建议使用新试剂，应重新试验。

【临床意义】　军团菌感染病例中85%是由嗜肺军团菌引起的，其中嗜肺军团菌1和6血清型占75%。嗜肺军团菌感染后，机体可产生特异性抗体。感染1周内IgM抗体产生，2周后IgG抗体出现，1个月内达到高峰。IgM抗体增高提示急性感染早期。IgG抗体可在体内持续数月，对流行病学调查有意义。此方法主要检测血清中嗜肺军团菌1～7抗体，故阳性结果只能说明感染菌为嗜肺军团菌1～7型。由于此法敏感率问题，阴性结果不能排除感染的可能。

【评价及注意点】

1．军团菌抗原与假单胞菌、变形杆菌、支原体、螺旋体等有交叉，可能导致假阳性反应。此法只检测嗜肺军团菌，对其他军团菌没有特异性。

2．检测时推荐取双份标本，第一份标本应在急性感染期采集，第二份标本应在感染后10～14d后采集，由于经常发生免疫应答的延迟，应在感染发病后20～40d期间再另外取样进行检测，初期的阴性检测结果不能排除军团病，有30%的病人会出现免疫应答延迟或感染4周后仍没有抗体产生。

3．本试验检测的敏感性很大程度取决于标本采集的时间，IgG敏感性为88．5%，IgM敏感性为59．8%。

4．操作前应仔细阅读使用说明书，并严格按使用说明书操作。