组织化学检测的应用

组织化学一般称特殊染色，是专门用于显示某些特定目的物的染色方法。目的是通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色试剂，定位地显示病变组织、细胞的化学成分（如蛋白质、酶类、核酸、糖类、脂类等）的改变，从而加深对形态结构改变的认识和代谢改变的了解，对某些代谢性疾病的诊断具有一定的参考价值，也可用于肿瘤的诊断及鉴别诊断。特殊染色的意义包括：①显示常规染色中不明显的目的物，如怀疑病变中有真菌，可用Grridley染色示之。②鉴别常规染色中不能区别的组织和病变类型，如用V.G染色可区别胶原纤维和平滑肌，苏丹染色可区别细胞内的脂滴和细胞水肿。③显示常规染色中不能显示的目的物，如网状纤维、神经细胞突起、结核杆菌等。因此，特殊染色是常规染色的必要补充。常用的组织化学染色有下列几类：

1.网状纤维染色也称嗜银纤维染色，是因其对银有较高的亲和力和多用镀银法显示而得名。主要用于未分化癌和肉瘤的区别、肾小球毛细血管丛基膜病变的观察、癌间质的研究等。

2.胶原纤维染色常用的有Van-Gieson染色法（V.G染色）和Masson三色染色法。主要用于胶原纤维与肌肉组织、神经组织的鉴别，在软组织肿瘤的鉴别诊断方面有一定价值。

3.弹力纤维染色常用的有Werigert染色法、地衣红染色等。主要用于动静脉的辨别、弹力纤维瘤的诊断及某些弹力纤维损伤性疾病的辅助诊断等。

4.糖原及黏液染色法常用的有PAS、AB及HID黏液染色等。主要用于细胞内糖原及黏液的鉴别，在糖原代谢性疾病、黏液性肿瘤的诊断以及胃黏膜肠上皮化生大肠型与小肠型的鉴别方面具有重要意义。

5.脂肪染色常用的有苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ染色和油红O染色等。一般用于确定细胞内空泡是糖原、水变性还是脂滴。可用于脂肪栓塞、细胞内脂肪变性的诊断，也可用于脂肪肉瘤与其他间叶性肿瘤的鉴别诊断。

6.病原微生物染色Gram碱性复红结晶紫法可用于革兰阳性与阴性细菌的区分；苯酚碱性品红法用于抗酸杆菌（结核杆菌、麻风杆菌）染色；六胺银法、PAS法及银氨G-S染色法可用于真菌的检测；地衣红法可用于乙型肝炎表面抗原的检测。

7.酶组织化学是通过细胞内酶催化底物的作用，并借助显色反应在切片或涂片上来显示组织或细胞中内源性酶的活性及定位的方法。1868年，Klebs首次用这一方法显示了组织中的过氧化物酶。目前，已逾100种酶可用此法显示。20世纪70年代以后，随着免疫组织化学技术的不断开拓，酶组织化学的发展趋缓，但在许多方面仍有应用价值。

酶组织化学的基本原理就是细胞内的酶催化分解合适的底物，使之产生中间产物，然后再与辅助物经一或两步反应生成有色不溶的终反应产物，沉积在原位以显示酶的存在。酶组织化学在以下几个方面有其应用价值：①反映细胞的代谢活性。既可以用来观察生理情况下组织中不同部位的细胞代谢的差异，还可以观察病理状态下细胞代谢活动的改变。如心肌梗死后4～6h内，H.E切片上看不出明显的变化，而用酶组织化学可显示心肌细胞在梗死早期（2h左右）即出现琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶和磷酸化酶的活性下降。②判定细胞类型。在组织培养和临床组织细胞检查时可用酶组织化学来确定其类型，如非特异性酯酶被认为是单核细胞和巨噬细胞的特异性标记物，据此可与其他细胞鉴别。③细胞定位。依靠酶组织化学可定位组织中的某些特殊细胞，如在小肠中用乙酰胆碱酯酶进行神经节细胞和神经纤维的定位。④细胞癌变过程的研究。如实验性肝癌的早期，葡萄糖-6-磷酸酶的活性明显下降，而6-磷酸脱氢酶的活性增高等。⑤用于肿瘤病理的鉴别诊断。如骨肉瘤中碱性磷酸酶增高；骨巨细胞瘤内含有丰富的酸性磷酸酶可以和破骨细胞瘤鉴别。⑥免疫组织化学和杂交组化的显示手段。无论是免疫酶组化还是标有生物素或地高辛探针的杂交组化，其最后一步常要依靠标记酶催化底物形成不溶的有色物质沉淀于原位以显示被检物质的存在。常用的标记酶是辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶。