如何判断鸡是否发生了禽流感

一般要分为4个步骤:一是禽流感疫情发生以后,首先由专家进行现场诊断和流行病学调查,可初步诊断为高致病性禽流感疑似病例。二是用血清学方法进行病毒的血凝素亚型鉴定。三是由国家禽流感参考实验室做病毒分离与鉴定,最终确定病毒毒型。四是农业部根据国家禽流感参考实验室的诊断结果,最后确认或排除高致病性禽流感疫情。

判断鸡是否感染了禽流感,除参考动物的临床症状外,主要是以病原分离和血清学检查为依据。病原分离和鉴定可以从活体或尸体分离病毒。用棉拭子法常可从活体的气管和泄殖腔中分离到病毒,特别是从泄殖腔中分离到病毒的机会较多,可用不同大小的棉拭子擦取气管或泄殖腔,尽量使棉拭子擦到深部,并能刮取泄殖腔黏膜表面的滤泡,以获得足量的标本,然后将拭子放入灭菌的保存液(25%~50%甘油盐水、肉汤或1 000 U/ml青霉素和10mg/ml链霉素的细胞维持液)中。若在48小时内进行试验,可将标本于4℃条件下保存。标本的采取时间很重要,一般在感染初期或发病急性期采取。如转为后期则因机体已形成足够的抗体而不易分离到病毒,病毒分离通常用鸡胚来进行。待检标本如系脏器,可用磷酸盐缓冲液或肉汤培养基制成5~10倍乳剂,加抗生素抑菌。如系泄殖腔拭子采取的材料,可将拭子放入溶液中浸渍,然后除去拭子,以2 000~3 000转/分钟离心30分钟去掉沉渣,吸上清液接种9~10天龄鸡胚尿囊腔,继续孵育48~72小时。如材料中含有病毒时,则接种48小时鸡胚死亡,但在多数情况下初代分离时鸡胚多不死亡,为此需将经72小时未死的鸡胚置冰箱内冻死后,收集尿囊液做第二代接种,如第二代接种的鸡胚仍不死亡,即可判定分离病毒为阴性。也有的实验室,用第三代接种鸡胚的结果作为判定依据。如接种的鸡胚死亡,其尿囊液对红细胞有凝集作用,可用已知的鸡新城疫阳性血清做血凝抑制试验,确定是否为新城疫病毒。只有排除新城疫后才能进一步用流感的阳性血清做琼脂扩散试验,进行流感病毒的初步鉴定,出现阳性结果时方能确定为A型流感病毒,如需进行亚型鉴定,可送专门实验室进行检查。血清学检查是诊断禽流感的重要的特异性方法,常用的有琼脂扩散试验、血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验等。琼脂扩散试验用于流感病毒型的检查,是以病毒的核蛋白抗原检查血清中的抗体,故不受病毒亚型的限制,多个亚型毒株抗体均可对抗原发生阳性反应。血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验,是用病毒的表面抗原(HA和NA)检查流感病毒的亚型。在实践中,由于病毒表面抗原的不稳定性,抗原成分易于发生变化,所以同一亚型的毒株,其抗原性往往并不一致,有的毒株抗原性可发生漂移。因此在检查时应注意,如某一亚型毒株的表面H抗原为H5,在某些条件下,其中部分成分可能发生变化,变化了的部分可能与H2或H3的成分相同,因此在原毒株的H5抗原成分中就含有H2或H3特异性抗体,所以在检查时,这种血清除可对H5抗原发生阳性反应外,也可对H2或H3发生阳性反应。在禽类血清中,常有干扰血凝试验的非特异性抑制物质,对这些物质,可用高碘酸钾或受体破坏酶加以处理。但在实际工作中,对每份血清进行处理是很难办到的,同时在处理血清时也会降低特异性抗体水平。因此,一些国家都根据自己的试验结果,规定血凝抑制试验的标准。用血凝抑制试验检查时,可采集发病期及发病2~3周的血清做对比检查,测其抗体水平,根据抗体效价的变动情况进行判定。若判断是否为高致病性禽流感,其方法应按国际兽疫局标准来确定,高致病性禽流感病毒鉴定标准如下:

(1)无菌的感染性鸡胚尿囊液做1∶10稀释后静脉接种8只4~8周龄易感鸡,0.2ml/只,接种后10天内有6只以上死亡。

(2)病毒型为H5或H7亚型禽流感病毒,致死禽数虽不及6只,但HA切割位点氨基酸序列与高致病性禽流感病毒相一致。

(3)病毒即使是非H5或H7亚型禽流感病毒,若能造成1~5只鸡死亡,而且能在无胰蛋白酶的细胞培养物中生长繁殖,产生细胞病变或蚀斑。

符合以上3个条件中任何一条,均可判定为高致病性禽流感病毒。