培养基成分对两种测定方法影响的比较

7．1．2　培养基成分对两种测定方法影响的比较

以经蒸馏水透析48小时去除离子的发状念珠藻细胞培养液为测定样品，在该样品中分别加入培养基中一种或几种成分（各离子浓度与培养基配方中一致），分别采用苯酚－硫酸法和蒽酮－硫酸法测定其多糖含量，观察这些成分是否会对测定结果产生影响。结果表明，发状念珠藻培养基成分会对两种测定方法的结果产生影响。采用苯酚－硫酸法测定时，加入微量元素、铁盐或者单独加入NaNO₃、CaCl₂、MgSO₄时对测定结果均有显著影响，而单独加入KH₂PO₄、NaHCO₃对测定结果的影响不显著；采用蒽酮－硫酸法测定时，只有单独加入MgSO₄时对该法的测定结果没有显著影响，其他成分的影响均为显著或极显著（表7－1、表7－2）。

表7－1　培养基成分对苯酚－硫酸法测定的影响

注：①P＜0．05为显著，P＜0．01为极显著。

②微量元素： MnCl₂· 4H₂O，ZnSO₄· 7H₂O，H₃BO₄，CuSO₄· 5H₂O，Na₂MoO₄· 2H₂O。

③铁盐： FeSO₄· 7H₂O，乙二胺四乙酸二钠。

表7－2　培养基成分对蒽酮－硫酸法测定的影响

注：①P＜0．05为显著，P＜0．01为极显著。

②微量元素： MnCl₂· 4H₂O，ZnSO₄· 7H₂O，H₃BO₄，CuSO₄· 5H₂O，Na₂MoO₄· 2H₂O。

③铁盐： FeSO₄· 7H₂O，乙二胺四乙酸二钠。

④“×”表示样品无法测定。

当加入NaNO₃时，采用苯酚－硫酸法测定多糖含量的测定值明显偏高，对测定结果影响非常显著。采用蒽酮－硫酸法测定，当NaNO₃存在时，加入蒽酮试剂后就立刻产生大量沉淀，无法测定其吸光度值。可见，NO₃^－对两种方法的测定结果干扰都非常大，特别是对蒽酮－硫酸法。

表7－1和表7－2中各种成分的加入量是按培养基配制时的最初浓度加入的，在发状念珠藻细胞培养过程中，各种培养基成分的浓度是不断变化的，因此无法根据试验的结果确定出一个校正值。所以，在测定发状念珠藻细胞培养液中的多糖含量时，必须先去除培养液中的各种离子。经试验测定：样品用蒸馏水透析48小时后（每12小时更换一次蒸馏水）测定值保持稳定，表明采用蒸馏水透析48小时可以消除这些小分子物质对测定结果的干扰。