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动物病毒病实验室诊断方法

时间:2022-11-19 百科知识 版权反馈
【摘要】:要鉴定为何种病毒,需用电镜观察和特种试验,鉴定其核酸类型和生物学特性,对常见病毒最好用血清学实验进行快速鉴定。再根据细菌形态特征和生理生化特性或血清学实验,对其进行鉴定。PCR仪检测技术已被世界动物卫生组织推荐为对虾病毒病的诊断方法之一,对虾的白斑综合症等病毒性疾病以及其他已建立了PCR诊断技术的水生动物的疾病可用此方法进行诊断。

四、实验室诊断

1.病原分离鉴定

(1)病毒的分离鉴定。以无菌方法取患病动物的肝、脾、肾等内脏器官,剪碎、研磨或捣碎,用Hank’s液或生理盐水或p H7.2PRS液制成1∶10的匀浆,加入青霉素和链霉素,每毫升含量为800~1 000 IU(或μg),冻融3次,离心后取上清液,使其通过细菌滤过除菌,取上滤液接种于敏感细胞或敏感动物,如果细胞出现细胞病变效应或动物出现与自然发病时间相同的症状时即可证明病毒分离成功。要鉴定为何种病毒,需用电镜观察和特种试验,鉴定其核酸类型和生物学特性,对常见病毒最好用血清学实验进行快速鉴定。

(2)病原菌的分离鉴定将濒死动物在无菌环境下用无菌水洗净并用紫外线照射,彻底清除体表杂菌后,以无菌方法从病灶深层的器官或组织内部取样接种到适宜的培养基,经28~30℃培养24~48h,取单个菌落纯化后用于致病性试验和细菌鉴定试验。通过致病性试验,接种动物如果出现与自然发病相似的症状,并且从人工感染发病的动物体上分离得到与接种菌相同的菌种,即可验证此菌种为该病的病原菌。再根据细菌形态特征和生理生化特性或血清学实验,对其进行鉴定。

2.免疫学技术检测

如血清中和试验、免疫荧光、酶联免疫检测等技术可供选用。

3.分子生物学诊断

(1)核酸探针检测。目前已有IHHNY、HPV等病毒的核酸探针杂交技术检测法可供检测。

(2)PCR仪检测。PCR仪检测技术已被世界动物卫生组织推荐为对虾病毒病的诊断方法之一,对虾的白斑综合症等病毒性疾病以及其他已建立了PCR诊断技术的水生动物的疾病可用此方法进行诊断。

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