菠菜叶色素的柱色谱分离

【目的与要求】

了解柱色谱分离技术。

【基本原理】

参看2.5.2节柱色谱分离技术。

【所需试剂】

新鲜菠菜；乙醇；石油醚；丙酮。

【操作步骤】

1.样品的制备

称取5.0 g洗净后的新鲜的菠菜叶，用剪刀剪碎并与10 mL乙醇拌匀，在研钵中研磨约5 min［1］，然后用布氏漏斗抽滤菠菜汁，弃去滤液。

将菠菜渣放回研钵，每次用10 mL 3∶2（体积比）的石油醚-乙醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤。合并深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用5 mL水洗涤两次，以除去萃取液中的乙醇。洗涤时要轻轻旋荡，以防发生乳化。弃去水-乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥后滤入圆底烧瓶，在水浴上蒸去大部分石油醚至体积约为1 mL为止。

2.装柱

选择一根合适的层析柱，在柱的下端放入少许脱脂棉或玻璃棉［2］和一张内径略小的圆形滤纸，将柱垂直固定于铁架台上，关上活塞，向柱中加入约柱高3/4的石油醚。

取一定量的中性氧化铝，通过一干燥的粗径玻璃漏斗连续而缓慢地将氧化铝加入柱中，在加入氧化铝的同时，必须打开层析柱的活塞，使石油醚的流出速度为1滴/s，以锥形瓶收集石油醚，并同时用木棒或带橡皮管的玻璃棒轻轻敲打柱身，氧化铝的装入量约为柱的3/4。装毕，将石油醚从活塞处慢慢放出，至石油醚液面与氧化铝柱上端相切后关闭活塞。

3.加样

沿柱壁加入已处理好的样品，打开活塞，使样品浸入氧化铝柱后关闭活塞，在柱的上端加入少许脱脂棉。

4.洗脱

在一个分液漏斗或滴液漏斗中装10～15 mL 1∶9的丙酮-石油醚洗脱液，并将其装到柱的上端。打开漏斗的活塞，让洗脱液缓慢滴入柱中［3］。当黄色谱带移动到柱的中间时，改用1∶1的丙酮-石油醚洗脱液，这样有助于混合液中极性较大的组分移动。观察不同色带的出现，用锥形瓶收集不同色带的洗脱液［4］。

【注释】

［1］捣烂时间不宜过长，5 min左右。

［2］脱脂棉或玻璃棉不宜加入过多，尽可能少而疏松，以免影响洗脱液的流速。有的层析柱下端有玻璃砂，不用加脱脂棉。

［3］洗脱液的加入速度应始终保持不让固定相露出液面，否则将出现断层或气泡，影响分离效果。

［4］黄色色带容易消失，需及时观察。

菠菜中的部分色素为：

【思考题】

为什么极性大的组分要用极性大的溶剂洗脱？