干细胞内耳移植

六、干细胞内耳移植

哺乳动物内耳感觉毛细胞仅在胚胎发育过程中产生，发育成熟后便不能再生，任何原因引起毛细胞丧失都将造成永久性听力下降。在目前治疗研究中，干细胞植入体内来替代损伤的组织在治疗帕金森、糖尿病等领域已经被广泛深入的研究。能否通过干细胞移植方法在所需部位定向产生毛细胞，成为近几年耳科研究热点。2001年Ito等首次将干细胞导入动物耳蜗，并且证实干细胞可以在耳蜗中存活。

干细胞治疗目的是通过诱导未分化细胞到受体所需部位来恢复正常细胞功能。就听力损失来说，干细胞有分化为新的毛细胞、神经元和支持细胞的潜能。最近一些研究探讨了干细胞在体外培养和植入体内后的应用，显示从各种组织来源的干细胞能分化为成熟细胞，表达一定基因，并标记一定目标细胞标记物。干细胞植入内耳的途径方法有经鼓阶打孔注射、经圆窗膜注射、中阶导入法、蜗螺旋管注入。导入后干细胞的存活时间则大致维持在1～9周不等。

1．鼓阶打孔途径　首先要暴露耳蜗底圈，于鼓阶处去除小片骨质，见淋巴液流出，用微量移液器将干细胞缓缓注入鼓阶。

2．圆窗膜途径　即暴露耳蜗圆窗，在圆窗膜处用针尖刺破圆窗膜后用微量移液器将干细胞缓缓注入鼓阶，与鼓阶打孔途径一样干细胞被注入鼓阶外淋巴中（图28－12）。

3．中阶导入法　同鼓阶打孔途径一样首先要暴露耳蜗底圈，去除耳蜗底圈鼓阶骨质，将带尖的微量注射器伸入鼓阶，再刺破基底膜，使针尖进入中阶。但是该方法导致内、外淋巴液混合，严重影响听力。如果在中阶外侧面通过血管纹、螺旋韧带进入中阶，也必然影响听力，因此，想直接将干细胞注入中阶而又不损伤听力则很难完成，有学者经前庭导水管，到达前庭和鼓阶。为了观察导入内耳的干细胞能否替代螺旋神经节细胞，有学者将干细胞通过鼓阶注入蜗轴或者Rosenthal管。为了尽量减少对听力的损伤，Ito等经过20年5　000多只动物，包括狗、猴、狒狒和大鼠，实现了将细胞导入内听道使细胞迁移到鼓阶和Rosenthal管。

图28－12　干细胞内耳移植途径

干细胞分化到什么阶段导入活体耳蜗最为合适，目前尚无一致意见。Coleman等将ESCs经体外诱导分化至神经前体阶段，导入耳蜗鼓阶。Corrales等将ESCs通过F12等因子作用，分化成祖细胞阶段再导入耳蜗。而Lang等将ESCs体外培养至表达nestin阶段，分别通过圆窗膜导入鼓阶外淋巴、经耳蜗骨板导入蜗轴Rosenthal管和经圆窗膜入鼓阶后再经基底膜导入中阶内淋巴中。但无论采取何种导入方法，都应尽力避免引起内、外淋巴液的混合，否则，不但会导致听力下降甚至全聋，导入的细胞也无法存活。