受精卵移植

将假孕小鼠麻醉，再腹部下方与最后一根肋骨平行的地方开一个小口，找到卵巢和输卵管，在输卵管壶口处用微吸管将注射过的受精卵移入，缝合伤口，按常规饲养，20d前后，后代幼鼠将产出。

从单细胞到囊胚的卵（受精后0.5～3.5d），可转移至假孕母鼠的生殖管道以完成发育。单细胞至桑椹胚的卵转移至受孕后0.5d的假孕母鼠的输卵管，这种输卵管移卵适用于被透明带包裹的卵；3.5d的囊胚转移至受孕后2.5d的假孕母鼠子宫，用于子宫移卵的卵不需要有透明带。将卵转移至假孕母鼠的较早阶段是为了给卵以充足的时间使其赶上发育阶段。用上述两种方法转移未注射的卵，其中50%～75%可发育成胎鼠，而转移注射过的卵可发育成胎鼠的占10%～30%。一般转移足够的卵使每胎产5～7仔。如仅一、两个卵发育成胎鼠则胚胎过大易导致难产，而产仔太少母鼠不予照料。如产仔过多其中一些可能长得太小，最好对每只假孕母鼠转移20～30个已注射的卵。如所转移的卵注射了相同的DNA，两只卵受体假孕母鼠可置于同一笼内，它们将所产的仔视为同一窝而一起照料。

1.输卵管移卵

（1）初学者可以用死鼠练习，也可转移染料或气泡以明确是否找到输卵管开口部。输卵管伞部的位置鼠间变异一般不大，经过练习即可掌握。

（2）将卵吸入移卵管。卵先移出二氧化碳孵箱，并从M16转入M2。移卵管一般由BDH硬玻璃拉制而成，前段较细部分长2～3cm，其直径在120～180μm，大于1个卵而小于两个卵。转卵管开口部需加热处理使平滑以尽量减少对输卵管的损伤。可先吸入矿物油前端较细部分再吸卵，这样吸卵及转移时较易控制。吸卵前先吸1个气泡，吸一段M2吸卵毕再吸第三个气泡和少量M2，见图4-6。将移卵管平放于一个合适的架上，待处理鼠以后使用，其间不碰移卵管。

（3）移卵

图4-6　准备移卵管做输卵管移卵

1）金属器械用酒精烧灼消毒。剪去鼠体后部毛发，用70%乙醇消毒。用解剖剪剪开1个小口，开口处位于脊柱左侧1cm，约与最后1根肋骨平齐。

2）用镊子沿切口撕开皮肤肌肉，透过腹膜可见卵巢（橘黄色）和（或）脂肪垫（白色）。然后用钟表镊在相当于卵巢上部的腹膜开1个小口。这时应尽可能避开血管以防出血。用外科缝合针在腹膜上穿一缝合线以便于其后腹膜固定。用无齿镊夹住脂肪垫并带出左侧的卵巢、输卵管与子宫。用脂肪夹（或动脉夹）夹住脂肪垫并将其放在鼠背后，这样卵巢与输尿管保留在腹膜外。

3）鼠可于手术前即置于解剖镜下，如打开腹膜后再移动，事先最好将鼠放在一直塑料盘上，一般头在左侧，脂肪垫翻向后，输卵管在显微视野中心。

4）在解剖镜下可见一透明膜覆盖输卵管，用两只钟表镊在相当于输卵管开口上部将透明膜打开一小口，尽可能避开血管以防出血。

5）用钟表镊轻轻拔输卵管开口部并看清其走向，将移卵管从开口部插入输卵管，吹移卵管直至第二、第三个气泡进入壶腹部。将移卵管略停一下再拔出，以防气泡以至卵逸出。

6）去除脂肪夹，用钝镊子夹住脂肪垫。带动卵巢、输卵管与子宫一并送回腹腔。可将腹膜缝一、两针，用损伤夹关腹腔。

可按上述方法将卵转移至右侧输卵管。

2.子宫移卵

（1）手术器械准备、鼠麻醉同输卵管转移。

（2）用70%乙醇将鼠后部消毒后，在背部相当于最下1根肋骨水平沿中线开1个纵行切口。用乙醇棉拭子擦去毛发。沿切口将肌肉撕开，通过腹膜可见卵巢与脂肪垫。用钟表镊夹起腹膜在相当于卵巢上部开1个小口，注意避开较大血管，将腹膜穿1根线以便于操作，见图4-7。

（3）用脂肪夹夹住脂肪垫，连同卵巢。输卵管、子宫一起拖出腹膜外。将鼠置于解剖镜下，见图4-8。

图4-7　子宫移卵的切口位置

图4-8　输卵管移卵中鼠的方位、手术切口及暴露组织

（4）用巴士德吸管或BDH硬玻璃毛细管拉制移卵管，其直径约200μm，火焰烧开瓶口边缘。在据开口端1cm处打弯，这样将便于掌握插入子宫的深度。

（5）先用矿物油充盈子宫移卵管至肩部，依次吹1个气泡、少量DMEM、第二个气泡、7～8个胚泡（约3/4的胚泡可发育成鼠胚胎）。吸胚泡时尽可能少吸培养液。吸第三个气泡。将子宫移卵管水平放置，在作转移前不碰移卵管。

（6）移卵

1）用细无齿镊轻轻夹住子宫上端，用5.5号针头或缝合针在距子宫上端数毫米处扎一个口，注意避开血管。要检查针头是否刺入管腔，可轻轻拔出再扎下，如来回轻松则说明已刺入。但不宜重复多次以防损伤子宫，见图4-9。

2）注意针刺的位置，拔出针，使子宫移卵管沿原针刺孔隙插入约5mm，轻轻吹移卵管直至将第二个气泡吹入子宫。

3）去除脂肪垫，用钝镊子夹住脂肪垫，连同子宫、输卵管及卵巢一起还回腹腔。腹膜缝一、两针，用损伤夹关腹腔。

可用上述方法将胚泡移入右侧子宫。子宫移卵或输卵管移卵术后，将鼠放回笼内，置于温暖安静处，一般0.5h可苏醒。

图4-9　A.子宫移卵暴露的组织及刺孔部位；B.由巴士德吸管拉制的子宫移卵管