1.超排卵 用孕马血清促性腺激素（pregnantmare serum，PMS）和人绒毛促性腺激素（human chorionic gonadotrophin，hCG）进行腹腔注射，做超数排卵处理。排卵发生在注射后10～13h，小鼠以4～6周龄为好。超排处理后，每个母鼠与一个公鼠交配雌鼠的排卵时间：晚10:00～12:00；雄鼠的排精时间：晚10:00～12:00；受精一般发生在凌晨1:00。
具体步骤如下
（1）配置PMS和hCG：粉剂用生理盐水溶解，终浓度为20U/ml，分装存于-20℃，可放置1个月。PMS和hCG注射剂量均为每次5U（0.1ml），腹腔注射。
（2）注射时间：第一天下午1～2时注射PMS，之后仍然放回原笼；46～48h之后（第3d）注射hCG，之后与单独饲养的正常公鼠同笼，第2天早上检查精栓。
（3）注射用注射器：1ml注射器，5.5号针头。
（4）注射部位：腹腔注射，注意避开膈肌和膀胱，注射完毕后略停再拔出针头，见图4-2。
2.取卵 第4d早上8点，挑出有精栓的小鼠，脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾用力向后拉，同时左手拇指与示指用力向下按住鼠头。将脊髓与脑髓拉断，鼠便立即死亡），见图4-3。70%的乙醇喷湿小鼠全身以消毒并防止毛飞扬。步骤如下：
（1）准备工作
1）取卵皿：M2培养液-受精供体鼠个数×2滴。
2）洗卵皿：1滴透明质酸酶（0.3mg/ml），5滴M2培养液。
3）未选组：M16培养液一层。
4）未注组：M16培养液一层。
5）洗卵管制备：①点燃乙醇灯，调节火焰到最佳。捏持玻璃毛细吸管或巴氏移液管在火焰上焰旋转过火；②当吸管开始变软，快速撤离火焰，向外急剧扯拉使吸管变长，形成口径大约200μm的吸管。注意制备过程中离开火焰的时间以及扯拉的力度，尽量保证制备吸管的一致性。③为吸管评分，轻柔地折断吸管，辨别其声音是否清脆，或扯拉吸管或只做弯曲直到两根同分数的吸管断裂为止。④解剖镜下（要在熔断仪上）检查吸管，并对其进行调整，确定其口径以及管口光滑平整。
（2）腹部V字切口，剥离腹部皮肤。
（3）分离腹膜，打开腹腔，取出输卵管（位于子宫和卵巢之间）。
（4）置入取卵皿中。
（5）取卵 在20×或50×解剖镜下找到输卵管，在卵管膨大的壶腹部（于卵管开口近处）隐约可见内含的胚卵，用钟表镊轻轻撕破输卵管，释放出胚卵团，用冲卵管将卵移入洗卵皿中。
（6）透明质酸酶把胚卵团消化分散开后，立即移到M2培养液中，以清除酶的继续作用。
（7）依次通过皿内其余培养液小滴，以继续除掉酶和摆脱碎片（碎片能堵塞吸管口）。
（8）清洗后的卵移入未选组培养皿中，放入37℃孵箱。
（9）此时的卵己可用作DNA注射之用。
图4-2 抓取小鼠腹腔注射
图4-3 脊椎脱臼处死小鼠
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