实训43 血清学反应——凝集反应
一、实训目的
学习凝集反应方法，观察凝集反应（玻片凝集和试管凝集）的现象及通过凝集反应测定免疫血清的效价。
二、实训原理
血清学反应是鉴定微生物的重要方法之一，具有较高的特异性和灵敏性，实践上应用较多。常用的实验有凝集反应和琼脂扩散沉淀反应。本实训主要介绍凝集反应。
颗粒性抗原（细胞形成——细菌、红细胞）与相应的抗体混合后，在电解质的影响下发生凝集成团的现象，称为凝集反应。电解质的作用主要是消除抗原抗体结合物表面上的电荷，使其失去同电相斥的作用而转为互相吸引。否则，即使抗原与抗体发生结合也不能聚合成明显的凝集块。
温度可促进抗原颗粒的分子运动，故可使细菌与细菌间互相碰撞的机会增多，使反应迅速发生，一般均放在37℃或56℃的水浴箱中进行反应，温度超过60℃则将引起抗体性质的损坏。
发生明显凝集反应（＋＋）的最高稀释度即为该免疫血清的效价。
三、实训器材
1．材料与试剂
伤寒杆菌琼脂斜面培养物，伤寒沙门菌菌液（Salmonella typhi，含9亿／mL伤寒杆菌的生理盐水悬液，并经60℃加温0．5h），伤寒杆菌免疫血清，生理盐水。
2．器具
玻片，小试管和试管架，吸管，酒精灯，接种环，水浴箱。
四、实训步骤
1．载玻片凝集法
（1）在载玻片的一端加1滴1∶10稀释的伤寒杆菌免疫血清，在一端加1滴生理盐水。
（2）自伤寒杆菌琼脂斜面上取少许细菌分别混入盐水与血清内，搅匀。
（3）将玻片略为摆动后静置于室温中，数分钟内即可观察到一端有凝集反应出现，另一端为盐水对照。
2．试管凝集法
此法适用于检查病人血清中有无特殊抗体存在，以及测定血清中抗体的效价。
（1）在试管架上放10支小试管，并编好号。
（2）用带橡皮头的吸管按表3－39加入生理盐水0．5mL于各试管中。
（3）用带橡皮头的吸管吸取免疫血清0．5mL注入另一较大试管中，加入4．5mL生理盐水混合，使成1∶10的免疫血清。
（4）吸0．5mL稀释免疫血清注入第1管，混匀后吸取0．5mL注入第2管，以此类推，直至第9管，混匀后自第9管吸出0．5mL弃去，第10管不加血清，以作对照。
注意：每管在加入血清混匀时，必须用吸管吸放三次以充分混匀，且第二次吸管的高度不能低于第一次，后一试管吸入吸管的高度不能低于前一试管所吸入的高度，否则稀释度将不准确；或每一稀释度换用一支干净吸管，则不必注意高度。
（5）在每管中加入抗原（细菌悬液）0．5mL。
（6）摇匀，把试管放在56℃水浴箱中2h后取出，18～24h后观察结果。
表3－39 试管凝集法
五、结果记录
1．记录方法
（1）完全凝集，凝集块完全沉于管底，液体澄清，以“＋＋＋＋”号表示。
（2）凝集块沉于管底，液体稍浑浊，以“＋＋＋”表示。
（3）部分凝集，液体浑浊，以“＋”表示。
（5）无变化记“－”。
取“＋＋”的稀释度的倒数作为免疫血清的效价。
2．结论
所测定的免疫血清的效价是多少？
六、思考题
（1）本实训的关键环节是什么？
（2）本实训有何经验与教训？
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