协同凝集实验

实验40　SPA协同凝集实验

(SPA co-agglutination test)

【目的】

1.了解协同凝集实验的原理和方法。

2.了解协同凝集实验的结果判断及应用范围。

【原理】

金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(staphylococcal protein A，SPA)能与人及多种哺乳动物(猪、兔、豚鼠等)血清中的IgG类抗体的Fc段结合。如将已知的特异性IgG与SPA作用，其Fc段与SPA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍保持其原特异性结合的活性，当其与特异性抗原相遇时，可出现特异性凝集反应。这种以金黄色葡萄球菌作为IgG抗体的载体进行的凝集反应称为协同凝集实验(图40-1)。

目前，此反应已用于流行性脑膜炎、伤寒、布氏菌病的早期诊断以及细菌、病毒等微生物的鉴定和分型。

图40-1　协同凝集实验

【材料】

1.含A蛋白的金黄色葡萄球菌、高效价脑膜炎双球菌(A群)免疫血清。均可从生物制品所购买。

2.待检脑脊液或血清0.3ml。

3.Hanks液或pH7.2磷酸缓冲盐水(PBS)。

4.37℃水浴箱、离心机、小试管、吸管、载玻片等。

【方法】

1.取A群脑膜炎双球菌高效价免疫血清0.1ml加10％含A蛋白的葡萄球菌悬液1ml，混匀，放37℃水浴30min。取出，4000r/min离心20min后弃去上清液，沉淀物用PBS洗两次后，配成1％悬液(即抗体标记的葡萄球菌悬液)备用。

2.取10％含A蛋白的葡萄球菌悬液1ml，4000r/min离心20min，弃上清液。将待检脑脊液或血清0.3ml加至沉淀的菌体中，混匀，室温静置5min后离心沉淀，吸取上清液作为吸收过的检样备用。

3.于洁净载玻片上加一滴吸收过的检样和一滴抗体标记的葡萄球菌悬液，混匀，摇动玻片5min，肉眼观察凝集现象。

【结果】

以能见到≥“＋＋”凝集者为阳性。

对照试验用已吸收过的检测样品对未致敏的10％A蛋白葡萄球菌悬液或PBS对致敏菌液均应为阴性。

判断标准:凝集程度以“＋”凝集者为阳性。

对照试验用已吸收过的检测样品对未致敏的10％A蛋白葡萄球菌悬液或PBS对致敏菌液均应为阴性。

判断标准:凝集程度以“＋”多少表示。　　　　

＋＋＋＋:菌体凝集成较大颗粒，液体清亮透明;

＋＋＋:菌体凝集成大颗粒，液体清亮透明;　　

＋＋:菌体凝集成较小颗粒，液体较透明;　　　

＋:部分菌体凝集成较小颗粒，液体浑浊;　　　

－:无凝集颗粒，液体呈均匀浑浊或延长至5min后才出现不明显的细小颗粒。

【思考题】

1.协同凝集实验与其他玻片凝集实验有什么不同?

2.协同凝集实验的原理是什么?