鼠疫细菌凝集试验

第一节　鼠疫细菌凝集试验

鼠疫细菌凝集试验是鼠疫抗原与鼠疫抗体在适宜的介质参与下直接发生凝集反应的试验，叫直接凝集试验或细菌凝集试验。该试验特异性较差，常易发生交叉凝集反应。但如用经吸收处理的鼠疫抗原来诊断被检血清，或用鼠疫特异血清检查抗原，仍能消除或减少交叉反应，提高其反应的特异性。细菌凝集试验一般常分试管法和玻片法两种，现分别介绍于下。

一、试管凝集试验方法

1．凝集反应原的制备　取37℃培养24～72h的斜面培养物，以灭菌生理盐水乳磨成均匀的菌悬液，用细菌比浊管配制成每毫升含10亿个菌体的菌悬液。若为强毒菌可经56℃30min灭活。但活抗原比死抗原敏感。既往一般用0．5%福尔马林盐水制备凝集原液，置室温过夜使用，但在实践中发现经福尔马林处理的菌体易自然沉降，导致结果判定困难。

2．血清的稀释　取洁净小试管（10×100mm）10支（可随实验需要增减），排列于试管架上，并注明检验号。除第一管根据最初欲稀释倍数或原血清量的多少，而相应地加入适量的生理盐水（一般用0．9ml）外，从第二管起，每管加入生理盐水各0．5ml。然后取适量的诊断血清（一般用0．1ml）放入第一管内，混匀后取0．5ml加入第二管内混匀；又从第二管吸取0．5ml放入第三管内混匀；以此类推倍比地稀释至最后一管，丢弃0．5ml于消毒液内。若要精确定量（如鉴定诊断血清的效价），每稀释一管应更换一支灭菌吸管。

3．试验　用灭菌吸管将凝集反应原液加入各血清稀释管内，每管0．5ml，充分振荡混匀后，置37℃温箱或恒温水浴箱内2h，轻轻取出观察初步结果，再置室温24h后观察最后结果。

每批试验，必须设正常血清、阳性血清、盐水等阴性对照和阳性对照管。

4．结果判定　被试管应与阴性和阳性对照管进行对比观察，按凝集结果的记录：“＋＋＋＋”：凝集物呈块状、颗粒状或絮状，完全下沉铺于管底，上清透明清亮。“＋＋＋”：凝集物呈颗粒状或絮状，下沉铺于管底，上清有少许乳悬物；“＋＋”：管底有絮状沉淀物，上清稍混浊；“＋”：管底有少量沉淀物，液体混浊；“－”：管底无沉淀物，液体完全混浊，与阴性对照完全一致。

以呈现“＋＋”的管判为阳性，作细菌鉴定时，若凝集管数出现接近免疫血清最高凝集价的阳性反应，而对照管的正常血清为阴性时，方可判定被检菌为鼠疫菌。作为病例诊断时，应作阳性血清对照，且经两次滴定凝集价有增高者才有诊断价值。

二、玻片凝集试验

将鼠疫高价免疫血清与可疑菌盐水悬液各一滴，置凹玻片上混匀，立即观察或稍放入温箱内一些时间后再行观察其凝集现象。有凝集者即可疑为鼠疫菌。