环境条件对微生物生长的影响

实训26　环境条件对微生物生长的影响

一、实训目的

（1）了解氧气、温度、pH、盐等环境因素对微生物生长的影响。

（2）掌握各种环境因素对微生物生长影响的实验方法。

二、实训原理

环境条件会影响微生物的生长，不同的微生物在生长时需要不同的环境条件。微生物按其对环境条件的需求可以分为好氧、厌氧微生物，嗜酸、碱、中性微生物和中温、耐高温、耐低温微生物等多种类型。温度、酸碱度可以影响微生物细胞的稳定性及催化反应酶的活性，从而影响微生物的活力和生长状况。微生物生长对渗透压也有要求，除了一些嗜盐微生物需要在有高浓度的盐存在的条件下才能生存外，一般微生物都只能在一定的盐浓度下生长。因此，对于某一种特定的微生物必须通过多种试验来确定其最佳的生长条件。

三、实训器材

1．菌种

大肠杆菌，枯草芽孢杆菌。

2．培养基

牛肉膏蛋白胨液体培养基，无机盐基础培养基。

3．器具设备

722型分光光度计，恒温振荡培养器，锥形瓶，试管等。

四、实训步骤

1．通气条件对微生物生长的影响

（1）在250mL的锥形瓶中，按30mL、50mL、100mL、150mL和180mL的装液量分装牛肉膏蛋白胨液体培养基，共5个样品，每个样品做3个平行对照，共15瓶，于121℃灭菌30min备用。

（2）将大肠杆菌按5%的接种量（种子液预先培养）接种上述培养基。

（3）将接种好的锥形瓶置于200r／min的37℃恒温振荡培养器上培养8h。

（4）从不同装液量的摇瓶中取样，用722型分光光度计测定其OD_600nm的值，根据其浊度的大小可以判断微生物的生长情况，从而确定大肠杆菌在好氧培养时对氧气的需求量。

2．温度条件对微生物生长的影响

（1）按每管4mL的装液量，将牛肉膏蛋白胨液体培养基分装至24支试管中，121℃灭菌30min备用。

（2）在试管上分别标注20℃、28℃、37℃、45℃，每个温度有6支试管，将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌按1%接种量接种到液体试管培养基中，每种菌每个温度接种3个平行样。

（3）按标记将各试管置于相应温度的恒温振荡培养器中培养20h，转速为180 r／min。

（4）从不同培养温度的试管中取样，用722型分光光度计测定其OD_600nm的值，根据其浊度的大小可以判断微生物的生长情况，从而确定这两种微生物的最佳生长温度。

3．pH对微生物生长的影响

（1）按每管4mL的装液量，将牛肉膏蛋白胨液体培养基分装至24支试管中，121℃灭菌30min备用。

（2）在试管上分别标注pH　5．0、pH　6．0、pH　7．0、pH　8．0，每个pH有6支试管，将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌按1%接种量接种到液体试管培养基中，每种菌每个pH接种3个平行样。

（3）将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别置于28℃和37℃的恒温振荡培养器中培养20h，转速为180r／min。

（4）从不同pH的试管中取样，用722型分光光度计测定其OD_600nm的值，根据其浊度的大小可以判断微生物的生长情况，从而确定这两种微生物的最佳生长pH。

4．渗透压对微生物生长的影响

（1）在无机盐基础培养基中加入NaCl，分别配制浓度为0．2mol／L、0．5mol／L、1 mol／L、2mol／L的含盐培养基。按每管4mL的装液量分装试管，每个浓度梯度配6管，121℃灭菌30min，备用。灭菌后测pH，保证pH不低于7．0。

（2）将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌斜面菌种用生理盐水悬浮，分别按1%的接种量接种至不同盐浓度试管中，每个梯度做3个平行。

（3）将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别置于28℃、37℃的恒温振荡培养器中培养20 h，转速为180r／min。

（4）从不同盐浓度的试管中取样，用722型分光光度计测定其OD_600nm的值，根据其浊度的大小可以判断微生物的生长情况，从而确定这两种微生物的最高耐盐能力。

五、结果记录

以柱状图形式记录氧气、温度、pH、渗透压等对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长的影响。

六、思考题

（1）高温和低温对微生物生长各有何影响？为什么？

（2）试从理论和实践上说明环境条件对微生物的影响。