促性腺激素释放激素促黄体生成素释放激素测定

一、概 述

促黄体生成素释放激素(luteinizing hormone-releasing hormone,LHRH)是十肽:pyro Glu(焦谷)-His(组)-Trp(色)-Ser(丝)-Tyr(酪)-Gly(甘)-Leu(亮)-Arg(精)-Pro(脯)-Gly(甘)-NH 2,分子量1181。

最初发现它刺激垂体分泌LH,故名。后来证明它也促进FSH分泌,因此,也可称作促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,Gn RH)更为贴切。

LHRH刺激垂体分泌LH的作用很强,体内注入2μg/kg即引起血内LH升高。LHRH使体外培养或灌流的垂体释出LH。抗LHRH血清可抑制鼠及猴的LH分泌。研究表明, LHRH的释放为脉冲式,脉冲频率及幅度对垂体反应的大小至关重要。

二、标本采集

1.采集时间

(1)空腹采集静脉血,收集于不含热源和内毒素的普通试管或EDTA、柠檬酸盐、肝素的抗凝管中。

(2)细胞上清液置于普通试管。

(3)组织采用指定器皿。

以上3种标本采集后立即送检。

2.标本保存 组织标本必须将其加入适量的生理盐水,制成组织匀浆,离心去除细胞或颗粒性物质;其他标本直接离心均可,如不能立即检测,请置于-70℃保存,禁止反复冻融。尽量不用溶血或高血脂的标本,不要在37℃或更高的温度下解冻,应在室温下使所有标本试剂均匀地充分解冻。

三、试验方法

酶联免疫吸附试验:应用双抗体夹心法测定标本中人促性腺激素释放激素水平。用纯化的人促性腺激素释放激素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入促性腺激素释放激素,再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促性腺激素释放激素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人促性腺激素释放激素浓度。

四、临床意义

诊断和治疗下丘脑性不育症、继发性闭经以及个别正常妇女由于长期服用甾体避孕药物而引起的闭经等。

妊娠妇女促性腺激素释放激素浓度显著高于正常非妊娠妇女,妊娠前半时间浓度达到最高,20～42周则显著降低。