不发酵革兰阴性杆菌

一、假单胞菌属

【概述】在人类非发酵菌感染中,假单胞菌占70%～80%,主要为铜绿假单胞菌,其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。本节以临床常见的几种假单胞菌为代述。

1.铜绿假单胞菌　革兰阴性杆菌,长短不一,呈球杆状或长丝状,成双或成短链排列。一端有单鞭毛,运动活泼。专性需氧菌,部分菌株能在兼性厌氧条件下生长,营养要求不高,普通培养基上生长良好,可生长的温度范围为25～42℃,最适生长范围为25～30℃,4℃不生长。在血琼脂平板上35℃培养18～24h,形成大而扁平、湿润、有金属光泽、蓝绿色、透明溶血环的菌落,有生姜味。在麦康凯琼脂平板上,可形成5种不同的菌落。①典型型:菌落不规则,边缘呈伞状伸展;②大肠菌样型:菌落圆形凸起,无色透明,似大肠埃希菌落;③粗糙型:菌落呈纽扣状,表面粗糙,或菌落中央隆起扁平;④黏液型:菌落光滑,隆起,呈黏液状,嵌入培养基中,不易挑起,似肺炎克雷伯菌菌落,但是无色;⑤侏儒型:生长缓慢,培养18h尚不见菌落,24h后才有细小菌落。

2.荧光假单胞菌　革兰阴性杆菌,无芽胞,无荚膜,端鞭毛。在血琼脂平板上35℃培养18～24h,形成圆形稍隆起、光滑、湿润、暗灰白色或灰绿色的菌落。在麦康凯琼脂平板上呈无色半透明菌落。在营养琼脂平板上形成荧光色的菌落。

3.恶臭假单胞菌　革兰阴性杆菌,有极端鞭毛,无芽胞,无荚膜。在血琼脂平板上35℃培养18～24h,形成大而湿润、灰色的菌落。在麦康凯琼脂平板上呈较大无色、湿润的菌落。在营养琼脂平板上呈黄绿色的菌落。在紫外线下可见荧光。

【鉴别要点】

1.铜绿假单胞菌　氧化酶试验阳性,分解葡萄糖,不分解乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖,动力、枸橼酸盐、精氨酸双水解酶和硝酸盐还原试验均阳性,吲哚、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶试验阴性。在4℃时不生长,而在42℃时可以生长。

2.荧光假单胞菌　氧化酶试验阳性,产荧光素,分解葡萄糖,不分解乳糖,明胶、精氨酸双水解酶试验阳性,大多数菌株硝酸盐还原试验阴性。

3.恶臭假单胞菌　氧化酶试验阳性,分解葡萄糖、果糖和木糖,不分解蔗糖,葡萄糖O/F试验为氧化型,精氨酸双水解酶试验阳性,明胶、硝酸盐还原、鸟氨酸脱羧酶和赖氨酸脱羧酶试验阴性,42℃环境中不生长。

4.铜绿假单胞菌　铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的鉴别:三者均可产生荧光色素,但铜绿假单胞菌42℃时生长,后两者则不能生长。荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌两者菌落相似,区别是恶臭假单胞菌不能液化明胶。

【临床意义】

1.铜绿假单胞菌　广泛分布于水、空气、土壤以及正常人体皮肤、呼吸道与肠道黏膜中,为条件致病菌。当手术、化疗、放疗、激素治疗等原因使人体抵抗力下降时容易引起感染。可引起烧伤创面感染、肺部感染、泌尿道感染、中耳炎、脑膜炎、败血症等。

2.荧光假单胞菌　存在外环境中,可从痰、脓肿穿刺液标本中分离出来。也可在冰箱贮存的血及血液制品中生长繁殖。故输血科应予以重视,避免该菌污染引起的医源性感染。

3.恶臭假单胞菌　可从临床标本中分离出来,但比例较低,常可引起尿路感染、皮肤感染及骨髓炎,分泌物有腥臭味。

二、伯克霍尔德菌属

【概述】伯克霍尔德菌为革兰阴性杆菌,细长稍带弯曲,两端钝圆,单个或成双排列,不形成芽胞和荚膜。马勒伯克霍尔德菌无鞭毛无动力,伪马勒伯克霍尔德菌有端丛鞭毛。伯克霍尔德菌为需氧菌,最适生长温度35℃。洋葱伯克霍尔德菌:生长较缓慢,在麦康凯琼脂上,其菌落可以是点状的和黏着性的,大多数临床分离的菌株是不产生色素的,但在含铁培养基上(如TSI斜面),许多菌株可产生毛黄色色素。伪马勒鼻伯克霍尔德菌运动活泼,最适生长温度35～37℃,4℃不能生长,而马勒鼻伯克霍尔德菌42℃不生长。马勒伯克霍尔德菌营养要求较高,在普通培养基上生长缓慢,发育不良。在血琼脂生长良好,能在麦康凯上生长,不产生绿脓素和荧光素。伪马勒伯克霍尔德菌营养要求不高,在普通培养基、血琼脂、麦康凯上生长良好。多数菌株在普通琼脂上形成圆形、突起、透明、有光泽、大小1～2mm的菌落,培养时间长久后,出现缴纹并呈红棕色。

【鉴别要点】氧化酶试验阳性,分解葡萄糖等多种糖类,葡萄糖O/F氧化型,动力和硝酸盐还原试验为阳性。

【临床意义】洋葱伯克霍尔德菌存在土壤及水中,是医院感染的常见病原菌之一,可从医院的自来水、体温表、喷雾器、导尿管分离到。引起败血症、肺炎、伤口感染、脓肿等;也是囊性纤维化和慢性肉芽肿患者呼吸道感染的机会致病菌。马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌均对马、骡、驴、猫、狗等动物感染。人类感染是经伤口或黏膜、呼吸道而进入体内。急性患者可有高热衰竭等全身症状;皮肤、皮肤下、鼻黏膜出现结节和溃疡,肺鼻疽病有胸痛、咳嗽、咯血等。病菌进入血液,可形成菌血症及内脏脓肿,最后常因脓毒血症死亡。慢性患者全身症状不明,可有皮肤、皮下溃疡,其潜伏期可达数年。从患者血液、尿液、痰液、皮肤伤口、脓肿的脓液中分离出以上两菌。

三、窄食单胞菌属

【概述】窄食单胞菌属有两个菌种:嗜麦芽窄食单胞菌和非洲窄食单胞菌,临床上最常见的是嗜麦芽窄食单胞菌。嗜麦芽窄食单胞菌为革兰阴性,单端鞭毛1～8根,多数为3根以上,有动力、无芽胞、无荚膜。对营养无特殊要求,最适生长温度为35℃,4℃不生长,42℃近半数生长,血琼脂及普通培养基生长良好。经35℃培养18～24h,菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素。

【鉴别要点】嗜麦芽窄食单胞菌较为特殊,氧化酶阴性、液化明胶、水解七叶苷、赖氨酸脱羧酶阳性、氧化分解麦芽糖。

【临床意义】该菌广泛分布于自然界中,河水、污水及自来水中均可检出,也可以从正常人体咽部、痰、粪便中检出。作为条件致病菌常引起抵抗力低下患者呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染,严重者出现菌血症及心内膜炎。在不发酵菌引起的感染中,仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,居临床分离率的第三位。

四、不动杆菌属

【概述】不动杆菌属为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的革兰阴性杆菌。临床常见菌种名称有:醋酸钙不动杆菌、洛菲不动杆菌、溶血不动杆菌、鲍曼不动杆菌、琼氏不动杆菌、约翰逊不动杆菌。鲍曼不动杆菌为革兰阴性球杆菌,单个或成双排列,有时呈丝状或链状,无芽胞,无鞭毛,革兰染色不易脱色。在血琼脂平板上35℃培养18～24h,形成直径2～3mm、圆形、灰白色、光滑、边缘整齐的菌落,部分菌落呈黏液状。在麦康凯琼脂等平板上35℃培养18～24h,形成粉红色菌落,48h后菌落呈深红色,部分菌株呈黏液型菌落。洛菲不动杆菌显微镜下形态同鲍曼不动杆菌,在血琼脂平板上35℃培养18～24h,形成中等大小、圆形、光滑、边缘整齐、灰白色菌落。在麦康凯琼脂等平板上形成圆形、光滑的无色菌落。

【鉴别要点】鲍曼不动杆菌氧化酶阴性,无动力,42℃时生长,葡萄糖O/F氧化型,丙二酸盐试验阳性,硝酸盐还原试验阴性。洛菲不动杆菌氧化酶阴性,不分解任何糖类,葡萄糖O/F为产碱型,动力、吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐、丙二酸盐和硝酸盐还原试验均阴性,42℃时不生长。

【临床意义】本菌存在于正常人体的皮肤、呼吸道和泌尿道,也广泛分布于自然界的水及土壤中。是引起医院感染的常见病原菌,常从感染患者的血、尿、脓液及呼吸道分泌物、脑脊液等标本中分离出来,为条件致病菌,可引起腹膜炎、脑膜炎、骨髓炎和关节炎菌血症和肺炎等。在不发酵菌的感染中仅次于假单胞菌,近年鲍曼不动杆菌感染呈上升趋势。

五、产碱杆菌属

【概述】该菌为革兰阴性杆菌,常单个存在,有时成弧形,成对或呈链状,周鞭毛、有动力,多数菌株无荚膜。在普通培养基上18～24h形成大小不等的菌落,脱硝产碱杆菌菌落呈凸隆起、边缘整齐、有光泽,在麦康凯琼脂、中国蓝琼脂及SS琼脂上形成无色透明菌落。在血琼脂平板上可形成灰色、扁平、边缘薄的较大菌落。在肉汤中培养24h呈均匀浑浊,表面形成菌膜,管底部形成沉淀,在含蛋白胨的肉汤中产氨,使pH至8.6为本菌特点。

【鉴别要点】氧化酶试验阳性,不分解任何糖类,葡萄糖O/F为产碱型,动力和枸橼酸盐试验阳性,明胶、脲酶、吲哚、葡萄糖酸盐和硝酸盐还原试验均为阴性。

【临床意义】相同于假单胞菌,自然界分布广泛,以粪产碱杆菌最为常见,可在水、土壤、人体及动物肠道中分离出该菌,是人体的正常菌群,也是医院感染的病原菌之一。可引起各种机会感染,包括心内膜炎、外伤感染和败血症等。

六、黄杆菌属

【概述】该菌属为革兰阴性杆菌,无鞭毛,无动力,无荚膜,无芽胞,菌体细长。在血琼脂培养基生长良好,需氧代谢,最适生长温度为35℃,菌落为1～1.5mm,光滑、有光泽、边缘整齐,典型菌落为淡黄色,也有的呈黄色或棕黄色。有的菌株在麦康凯琼脂上生长,在SS琼脂平板上不生长。

【鉴别要点】氧化酶、触酶、磷酸酶阳性。

【临床意义】本菌常存于水、土壤、植物中,也可发现于食品、乳制品和蔬菜中,还可从健康人口腔黏膜、上呼吸道、皮肤中检出,是条件致病菌,也是引起医院感染的常见菌之一。可引起术后感染、败血症,在新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎中分离出脑膜炎败血性黄杆菌比例较高。

七、莫拉菌属

【概述】莫拉菌为革兰阴性球杆菌,呈双短链状排列,具有多形性。幼龄培养物为细杆状,老龄培养物多呈球状,此特点可与奈瑟菌在形态上相鉴别,本菌革兰染色阴性,但不易退色。本菌营养要求较高,首次培养最好加入兔血或其他动物血清及心脑浸液。最适生长温度为32～35℃,血琼脂平板上生长良好,部分菌株在普通培养基上可以生长,也可在麦康凯培养基上生长,但不能在SS上生长。血琼脂平板上经24～48h后出现针尖大小、圆形、凸起、光滑湿润、无色不溶血的菌落。在心肌浸液琼脂或5%兔血琼脂平板经35℃、24h培养后,可见有从针尖大小到直径2mm之间的圆形凸起、光滑半透明、边缘整齐不溶血的菌落,有的菌落培养数日后,菌落周围出现绿变区,时间延长可见柠檬色素至黄色素。

【鉴别要点】根据本菌氧化酶阳性、触酶阳性、无动力、不分解任何糖类、吲哚试验阴性进行鉴别。

【临床意义】本菌属可从人类或温血动物体内检出,能引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症。近年来非液化莫拉菌引起脑膜炎及婴幼儿菌血症者日益增多,应引起高度重视。

八、军团菌属

【概述】本菌属为革兰阴性杆菌,着色浅,有时呈线状,无芽胞,无荚膜,有端鞭毛或侧鞭毛。本菌为严格需氧,营养要求苛刻,生长缓慢,氧气含量低生长速度减慢,部分菌株在2.5%～5%的CO2环境中生长良好,最适生长温度为35℃,最适pH 6.7～7.0。初次分离必须采用L-半胱氨酸和铁离子,在活性炭-酵母浸液琼脂培养基(BCYE)上3～5d可形成1～2mm直径的光泽菌落,在F-G琼脂培养基上,3～5d可见针尖大小的菌落,在紫外线照射下可产生荧光。

【鉴别要点】严格需氧,触酶阳性,可液化明胶,不分解糖类,部分菌株氧化酶阳性。此外军团菌在MH-LH琼脂上可产生褐色色素。

【临床意义】该菌存在于水和土壤中,常经供水系统、溶洞和雾化吸入而引起肺炎型和非肺炎型感染。肺炎型主要由嗜肺军团菌及米克戴德军团菌引起,潜伏期2～10d,除呼吸道症状外还有明显的多器官损害、头痛、畏寒、发热、消化道及神经系统症状及体征,致死率高。非肺炎型潜伏期短,症状轻,以乏力、肌痛、发热、干咳常见,发病率高,但无死亡。中老年人有慢性心、肺、肾病变、糖尿病、血液病、恶性肿瘤、艾滋病或接受免疫抑制剂者易发本病,且死亡率高达45%,并易合并其他微生物感染,形成难治性肺炎。

(张金艳　郭映辉　李立新)