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血清免疫球蛋白最适宜测定方法

时间:2022-04-10 理论教育 版权反馈
【摘要】:机体免疫球蛋白的含量可因疾病而明显增加或减少,检测其含量可了解机体的体液免疫功能状态,帮助诊断免疫增生、自身免疫性疾病、免疫缺陷、变态反应及感染等多种疾病,具有重要的临床意义。人体免疫球蛋白的含量随着年龄的增长而逐渐升高,到12岁以后基本稳定不变。免疫球蛋白IgE主要由鼻咽部、扁桃体、支气管、胃肠道等黏膜固有层的浆细胞分泌,血清含量低,仅为血清总Ig的0.002%,在个体发育中合成较晚。

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是一组具有抗体活性的球蛋白,由浆细胞合成与分泌,存在于机体的血液、体液、外分泌液以及部分细胞的表面,介导体液免疫。应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分为五类IgA、IgG、IgM、IgD和IgE。

机体免疫球蛋白的含量可因疾病而明显增加或减少,检测其含量可了解机体的体液免疫功能状态,帮助诊断免疫增生、自身免疫性疾病、免疫缺陷、变态反应及感染等多种疾病,具有重要的临床意义。

免疫球蛋白的检测方法很多,有单向免疫扩散法、免疫比浊法、酶联免疫吸附法、放射免疫法等各种免疫电泳方法。临床应根据检样和检测目的的不同而选择合适的方法。

(一)免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定

IgG主要由脾和淋巴结中的浆细胞合成与分泌,约占血清中总Ig的75%,是血清中主要的抗体成分,在机体的免疫防御中起重要作用,大多数抗细菌、抗病毒、抗毒素抗体为IgG类。另外IgG是唯一能通过胎盘的Ig,通过自然被动免疫使新生儿获得免疫抗体。

IgA主要由肠系淋巴结中的浆细胞产生,约占血清中总Ig的 10%,分为血清型与分泌型两种。IgA具有抗细菌、抗病毒、抗毒素的作用,尤以分泌型IgA(SIgA)在机体中的局部免疫中起着重要作用,如抗呼吸道消化道和泌尿生殖道的感染等,是机体抗感染、抗过敏的重要免疫“屏障”。

IgM为五聚体,是Ig中分子量最大者,分子结构呈环形,由五个IgM单体通过J链连接而成。在个体的发育过程中,IgM是出现最早的Ig,当机体受到抗原刺激后,IgM也是最早出现的抗体。其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高500~1 000倍,因此IgM在机体早期的免疫防御中占有重要位置。人体免疫球蛋白的含量随着年龄的增长而逐渐升高,到12岁以后基本稳定不变。

【测定方法】

速率散射比浊法

速率法是一种先进的动力学测定法,所谓速率是指抗原-抗体结合反应过程中,在单位时间内两者结合的速度,连续测定各单位时间的反应速率即为动态观察。随着时间的延长,复合物产生的总量逐渐增加,但在每个单位时间内产生的速率并不是都增加,而是在某个单位时间内达到高峰,以后复合物产生的速率逐渐下降。这个峰值的高低和抗原的含量成正比。在峰值时产生的光散射信号最强,速率检测即捕捉峰值信号,经电脑处理,即可得到被检抗原的浓度。

【参考范围】

血清 IgG:6.94~16.18g/L

   IgA:0.68~3.78g/L

   IgM:0.60~2.63g/L

不同年龄组人群免疫球蛋白含量各有不同,可参考表7-1。

【临床应用价值】

1.免疫球蛋白IgG,IgA,IgM均升高常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。

表7-1 各年龄组健康人血清中IgG、IgA、IgM含量(g/L)

2.单一免疫球蛋白升高主要见于免疫增殖性疾病,如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等。

3.免疫球蛋白降低常见于各类先天性免疫缺陷病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制药的病人,单一IgA降低常见于反复呼吸道感染患者。

4.新生儿和婴幼儿由于体液免疫功能尚未成熟,免疫球蛋白的含量较成人低,需按年龄组参考值来进行分析和判断。

【影响因素】

1.免疫球蛋白与年龄、性别有一定关系,婴幼儿、儿童血清中免疫球蛋白含量较成年人低,女性稍高于男性。

2.在判断结果时应综合考虑。如有M蛋白,可进一步做血清或尿液免疫固定电泳,检测轻链和重链。

3.免疫球蛋白含量因检测方法的不同而存在差异,各地区参考范围也不尽相同。

(陈 静)

(二)免疫球蛋白IgE测定

免疫球蛋白IgE主要由鼻咽部、扁桃体、支气管、胃肠道等黏膜固有层的浆细胞分泌,血清含量低,仅为血清总Ig的0.002%,在个体发育中合成较晚。IgE为亲细胞抗体,能于肥大细胞、嗜碱性粒细胞膜上的FcεR结合,在速发型超敏反应性疾病的发病中具有重要作用。

【测定方法】

酶联免疫吸附法(ELISA)

原理:采用双抗体夹心ELISA,即在微孔板内包被马抗人IgE,加入待检测血清,孵育洗涤后再加入兔抗人IgE,孵育洗涤后再加入酶标记羊抗兔IgG,孵育洗涤后,再加入酶底物显色,用酶标仪测定吸光度,再由校正曲线计算IgE的含量。

【参考范围】

血清:0.1~0.9mg/L

【临床应用价值】

1.IgE升高见于速发型超敏反应性疾病,如过敏性支气管哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、荨麻疹等。

2.部分与IgE有关的非过敏性疾病也可升高,如IgE型骨髓瘤、寄生虫感染等。

3.急慢性肝炎、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等有时也可见血清IgE升高。

【影响因素】

1.兔抗人IgE及结合物浓度及孵育时间是影响本结果的主要因素,必须选择它们的最适条件。

2.年龄、性别均可影响总IgE水平,一般男性高于女性;新生儿水平低,青春期水平最高,30岁以后逐渐下降。

3.不同种族血清总IgE水平也有差别,以黑人水平最高,混血人种次之,黄种人水平也较高。因此,在评价总IgE结果时要考虑到这些因素。

(陈 静)

(三)免疫球蛋白IgD测定

正常人血清IgD浓度很低,平均为0.03mg/ml。IgD可在个体发育的任何时间产生。五类Ig中,IgD的铰链区较长,易被蛋白酶水解,故其半衰期很短(仅3d)。血清IgD的确切功能仍不清楚。

【测定方法】

酶联免疫吸附法(ELISA)

原理:先将马抗人IgD包被在固相反应板上,加待测血清后再加兔抗人IgD双抗体夹心后,再加羊抗兔-HRP,加底物作用呈显色反应。

【参考范围】

血清:0.001~0.004g/L

【临床应用价值】

1.增高 主要见于IgD型骨髓瘤、慢性感染,结缔组织病,葡萄球菌感染、妊娠末期、大量吸烟者。

2.降低 见于无丙种球蛋白血症,矽肺、细胞毒性药物治疗后。

【影响因素】

1.用于测定IgD的方法有单向扩散法、放射免疫和ELISA法等。由于IgD含量较低,单扩法有10%左右正常人测不出来,所以现在一般选用ELISA法。正常人血清中每次IgD含量变动范围很大,因此对每一个体一次测定的IgD数值很难判定其临床意义,最好是连续动态测定,观察其变化情况。

2.试剂盒自冷藏处取出后应恢复至室温。待测血清为了批量检查常需较长时间保存以集中标本,故以-20℃冻存为宜。取出时应在室温中自然融化并轻轻混匀,切忌强烈振摇。

3.不同厂家、不同批号试剂不可混用:不用过期试剂。

(陈 静)

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