多药耐药性相关蛋白

1992年，Cole等在2种非P-gp MDR细胞中发现一种膜转运蛋白，并把相关的基因命名为MRP（多药耐药性相关蛋白），该基因编码1　522个氨基酸残基组成的蛋白质，称为多药耐药性相关蛋白。MRP在H69AR细胞中，比药敏细胞H69及逆转细胞H69PR表达水平高100倍，MRP基因扩增达40～50倍水平。Slovak等对耐多柔比星MDR细胞HT1084／DR4的研究，发现P-gp不过度产生，而HT1084／DR4MRP mRNA比敏感HT1084细胞表达水平高14倍，认为MRP基因的高表达与MDR有关。关于MRP引起MDR的机制主要集中在MRP与GS-X泵的活性上，谷胱甘肽是细胞中主要的Ⅱ相解毒物质，在相关酶（如GSH-Px，GST等）催化下，与H2O2、氧自由基还原为水，亲电子剂和GSH结合，形成GS-X复合物，然后被转运到胞外。目前认为，MRP就是依赖于ATP的GS-X泵，GSH、葡萄糖醛酸和硫酸盐共轭物是其底物。

MDR就是在肿瘤化疗过程中，肿瘤除对所用药物发生耐药性以外，还对与该药结构完全不同的其他药物亦产生耐药性，MDR是目前肿瘤化疗失败的主要原因之一。Jay等用RT-PCR的方法在对22例骨肿瘤化疗前后同一患者的标本研究中发现，化疗后MDRI的表达比化疗前明显增高，证明了化疗药物的应用可以诱导肿瘤细胞多药耐药性的产生，造成化疗失败。

对于抑制MDR基因，还可应用基因的办法，核酶和反寡义核苷酸都是当前关注的对象。核酶是一类具有催化活性的小分子RNA，它能特异地与靶RNA分子特定位点结合，进行切割，阻断目的基因的表达。因此，只要明确了某一基因的结构，就能设计合成特异性切割其mRNA的核酶，阻断该基因的表达。对mdr1基因也可以设计出相应的核酶，使其在特定的位点对靶mdr1mRNA进行切割，阻断P-170蛋白的形成，达到逆转MDR的目的。有学者分别设计合成出针对mdr1第196位密码子和第880位密码子的核酶，各自应用其方法将其核酶基因转入培养细胞中，结果均检测到P-gp表达下降，耐药细胞重新获得对化疗药物的敏感性，表现在IC50值的下降，最多可达300倍之多。但由于MDR的产生是由诸多因素协同作用的结果，希望用核酶就能够完全逆转MDR显然还不现实，同时核酶极易被核酸酶降解，暂时还限制了核酶的应用。反义寡核苷酸可直接结合到DNA双链的特定部位，形成三聚体，影响转录因子的结合，使转录过程不能启动，在转录和翻译水平阻断目的基因的表达，从而达到治疗目的。此技术也应用于药物的逆转治疗。有作者在耐药大肠癌细胞中，应用硫代磷酸类反义寡核苷酸明显降低P-gp的表达而逆转耐药，展示出一种全新的逆转概念。