【目的】 利用离体蛙心的灌流方法，观察高钾、高钙、低钙、肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
【原理】 作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动，因而可将其作为实验对象进行处理和观察。另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，并受多种神经、体液因素的调控，离体心脏一样，当改变灌流液的成分或给予某些活性物质刺激，可以引起心脏活动的改变。高钾可引起心肌细胞自律性、兴奋性、传导性和收缩性都降低，心脏收缩力减弱、心跳减慢，严重可致心脏停搏于舒张状态；高钙可使心肌收缩力增强，钙浓度过高时可使心肌停搏于收缩状态，而低钙使收缩力减弱；血钠的一般变化对心肌生理特性影响不大。肾上腺素对心脏具有兴奋作用，使心率加快、传导加快和收缩力增强，故在临床上用作强心剂；乙酰胆碱对心脏具有抑制作用。
【材料】 蟾蜍或蛙；计算机生物信号处理仪，张力换能器；蛙心夹，滑轮，铁支架，双凹夹，蛙心插管，蛙类手术器械，滴管；任氏液，0.65%NaCl溶液，3%CaCl2溶液，1%KCl溶液，1∶10 000肾上腺素溶液，1∶100 000乙酰胆碱溶液，1%普萘洛尔溶液。
【方法和步骤】
1.离体蛙心制备
（1）取蟾蜍1只，破坏脑和脊髓后，使其仰卧固定在蛙板上，从剑突下将胸部皮肤向上剪开，然后剪掉胸骨，打开心包，暴露心脏。
（2）在主动脉干下方引2根线。一条在左主动脉上端结扎作为插管时牵引使用，另一根则在动脉圆锥上方系一松结，用于结扎固定蛙心插管。
（3）左手持左主动脉上方的结扎线，用眼科剪在松结上方左主动脉根部剪一小V字形切口（切口至心室距离应与蛙心插管头部的长度相似），右手将盛有少许任氏液的蛙心插管由此剪口处插入动脉圆锥。当插管头到达动脉圆锥时，用镊子夹住少许动脉圆锥处组织，将插管稍稍后退，并插管头朝向心室中央方向，镊子向插管的平行方向提拉，心室收缩期时将插管插入心室（图5-11）。判断蛙心插管是否进入心室的根据是插管内任氏液的液面是否能随心室的舒缩而上下波动。如蛙心插管已进入心室，则将预先准备好的松结扎紧，并固定在蛙心插管的侧钩上以免蛙心插管滑出。
图5-11 蛙心插管
（4）剪断主动脉左右分支后，轻轻提起蛙心插管以抬高心脏，在静脉窦与腔静脉交界处结扎，结扎线应尽量下压，以保证静脉窦与心脏相连，在结扎线外侧剪断所有组织，将蛙心游离出来。
（5）用新鲜任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液，直至蛙心插管内无血液残留为止。此时蛙心如有规律性搏动，插管内液面可随蛙心搏动而上下波动，则说明离体蛙心已制备成功，可供实验。
（6）将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将蛙心夹的线头通过滑轮连至张力换能器的应变梁上（图5-12），此线应有一定的紧张度。
2.仪器连接 按图5-12连接装置。将张力换能器固定于铁支柱上，换能器输出线接计算机生物信号处理仪输入通道。
3.仪器参数设置
（1）RM6240C系统：点击“实验”菜单，选择“循环”菜单中的“蛙心灌流”。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数：通道时间常数为直流，滤波频率10Hz，灵敏度3g，采样频率400Hz，扫描速度：1s／div。
（2）MedLab系统：点击“实验”菜单，选择“常用生理学实验”中的“蛙心收缩”项目。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数：通道放大倍数200～500、下限频率DC、上限频率10Hz，采样间隔5ms。
图5-12 蛙心灌流仪器连接方法
【观察项目】
1.描记正常的蛙心搏动曲线，注意观察心搏频率、心室的收缩和舒张程度。
2.把蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65%NaCl溶液，观察心脏搏动变化。
3.把0.65%NaCl溶液吸出，用新鲜任氏液反复换洗数次，待曲线恢复正常时，再在任氏液内滴加3%CaCl2溶液1～2滴，观察心脏搏动变化。
4.将含有CaCl2的任氏液吸出，用新鲜的任氏液反复换洗，待曲线恢复正常后，在任氏液中加1%KCl溶液1～2滴，观察心脏搏动变化。
5.将含有KCl的任氏液吸出，用新鲜的任氏液反复换洗，待曲线恢复正常后，再在任氏液中加1∶10 000的肾上腺素溶液1～2滴，观察心脏搏动变化。待心脏搏动稳定后，向灌流液中加1%普萘洛尔溶液1～2滴，观察心脏搏动变化。
6.用新鲜的任氏液反复换洗，待曲线恢复正常后，再在任氏液中加1∶100 000的乙酰胆碱溶液1～2滴，观察心脏搏动变化。
【注意事项】
1.制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。
2.各项目效应出现后应立即用新鲜任氏液换洗，以免心肌受损，而且必须待心脏搏动恢复正常后才能进行下一步实验。
3.蛙心插管内液面高度应保持恒定，以免影响结果，故可在插管上用记号笔标出液面高度以作为标准。
4.滴加药品和换取新鲜任氏液，须及时做好标记，以便观察分析。
5.新鲜任氏液和蛙心插管内溶液所用的吸管应区分专用，以免影响实验结果。
6.药物作用不明显时，可适量加药，但应密切观察加量后的实验结果，以防心肌损伤。
思考题
1.正常蛙心搏动曲线的各个组成部分分别反映了什么？
2.用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，将观察到心脏搏动曲线发生什么变化？为什么？
3.在任氏液中加入3%CaCl2溶液灌注蛙心时，将观察到心脏搏动曲线发生什么变化？为什么？
4.在任氏液中加入1%KCl溶液灌注蛙心时，心脏搏动曲线又将出现什么变化？为什么？
5.在任氏液中加入肾上腺素溶液灌注蛙心时，心脏搏动曲线将发生什么变化？为什么？
6.在任氏液中加入乙酰胆碱溶液灌注蛙心时，心脏搏动曲线又将发生什么变化？为什么？
7.在任氏液中加入普萘洛尔溶液灌注蛙心时，心脏搏动曲线又将发生什么变化？为什么？
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
