支原体及其检验

1．支原体的生物学特性

（1）形态与结构：个体微小，多形态，革兰阴性，常用姬姆萨染色。与细菌区别的主要特点是无细胞壁仅有细胞膜。细胞膜中胆固醇类含量高，因此凡能作用于胆固醇的物质可破坏细胞膜致其死亡。

（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，95%N2、5%CO2环境中生长良好，营养要求较一般细菌高。菌落特征与细菌L型菌落极相似，37℃3～10d可观察到菌落呈“荷包蛋”样生长。不同点在于：细菌L型在无抗生素等诱导因素作用下，易返祖为原菌，而支原体不出现返祖现象。

（3）生化反应：常以发酵葡萄糖、水解精氨酸和尿素等作为初步鉴别依据。肺炎支原体、生殖道支原体可分解葡萄糖，产酸不产气，人型支原体不分解葡萄糖，可利用精氨酸产NH3。解脲脲原体不能利用葡萄糖和精氨酸，可分解尿素产碱。进一步鉴别的依据有：四氮唑还原能力、亚甲蓝抑制、溶解红细胞、吸附红细胞等。

（4）抗原成分：抗原性主要来自细胞膜，生长抑制试验（GIT）和代谢抑制试验（MIT）利用抗原的型特异性作鉴别依据。

（5）抵抗力：对热的抵抗力较弱，45℃，15～30min或55℃，5～15min即死亡，耐冷，不耐干燥，容易被重金属盐类、石炭酸、来苏儿等化学消毒剂灭活。因无细胞壁，对青霉素、头孢菌素等不敏感，对四环素、红霉素等敏感。

2．肺炎支原体 典型形态类似酒瓶状，姬姆萨染色淡紫色，最适pH 7．6～8．0，P1蛋白是肺炎支原体的主要特异性免疫原，是血清学诊断的主要抗原。主要通过飞沫传播，是人类原发性非典型性肺炎的主要病原体之一。分离与鉴定是确诊支原体感染的可靠方法之一，初次分离生长缓慢，常不出现“荷包蛋”样，需经数次传代后，菌落才开始典型，时间需1～2周或更长，对临床快速诊断意义不大。生化反应：①发酵葡萄糖产酸，不能利用精氨酸、尿素；②TTC还原试验：使无色TTC还原为粉红色；③GIT及MIT试验；④能发生红细胞吸附。血清学试验：

（1）特异性血清学试验。①ELISA：敏感性、特异性高，可检测IgM和IgG抗体。②补体结合试验：一般血清滴度≥1∶64～1∶128即为阳性，双份血清效价至少有4倍增长有诊断价值，主要检测IgM抗体，初次感染阳性，再次感染阴性。③间接血细胞凝集试验：主要检测IgM抗体，敏感度略高于补体结合试验。

（2）非特异性血清学试验。将患者的稀释血清与O型Rh阴性红细胞在4℃下做冷凝集试验，血清滴度≥1∶64为阳性，双份血清至少效价有4倍增长有诊断意义。

3．解脲脲原体 液体培养基中菌体镜下呈球形，姬姆萨染色呈紫蓝色，最适pH为5．5～6．5，本菌具有尿素酶可分解培养基中的尿素产氨，令pH升高，可加速其死亡，本菌具有种特异性抗原——脲酶抗原。是人类生殖道最常见的寄生菌之一，条件致病，主要通过性行为传播，是非淋菌性尿道炎的主要病原体之一。

采集相应标本：尿液、前列腺液、精液、阴道分泌物等，最好在95%N2和5%CO2环境中，37℃孵育，如出现典型菌落，则进行生化试验及特异性血清学MIT和GIT试验进行最终鉴定。