索氏提取法

索氏提取法，又名连续提取法、索氏抽提法，是从固体物质中萃取化合物的一种方法，是测定脂肪含量普遍采用的经典方法，是国标的方法之一，也是美国AOAC法920.39， 960.39中脂肪含量测定方法(半连续溶剂萃取法)。随着科学技术的发展，目前已有自动脂肪测定仪法。以下重点介绍索氏提取法的原理，适用范围及特点、操作过程、注意事项等。

1.原理

利用脂类物质不挥发的特性，将经前处理后的样品用无水乙醚或者石油醚回流提取，利用相似相溶原理，使样品中的脂肪进入溶剂中，蒸去溶剂后得到的残留物，即为脂肪(或粗脂肪)。本法提取的残留物为脂肪类物质的混合物，除含有脂肪外还含有磷脂、色素、树脂、固醇、芳香油等醚溶性物质。因此，用索氏提取法测得的脂肪也称之为粗脂肪。

2.适用范围及特点

索氏提取法适用于脂类含量较高，结合态的脂类含量较少，能烘干磨细，不易吸湿结块的样品的测定。索氏提取法测得的只是游离脂肪，而结合态脂肪测不出来。对于食品中结合态的脂肪不能用乙醚、石油醚进行直接提取，需经过在一定条件下进行水解等处理使结合脂肪转变为游离脂肪后才可提取。

索氏提取法是测定脂肪含量使用最为广泛的方法，其优点:

1)选择性好

索氏萃取的选择性主要取决于目标物质和溶剂性质的相似性。萃取剂可用CS2、苯、甲醇等。通常的做法是将萃取剂按照极性不同的顺序进行多级萃取。从而提高了产品的萃取纯度，将不同类的物质分别萃取出来。

2)能耗低

由于索氏萃取是直接对萃取剂进行加热，且选用的萃取剂一般沸点都较低，从根本上保证了能量的快速传导和充分利用。而且萃取剂是在索氏萃取器中循环利用的，这既减少了溶剂用量，又缩短了操作时间，大大降低了能耗。

3)设备简单、操作简便

不同的分离方法有不同的操作方法，对应的实验设备也各有不同。但索氏萃取的设备简单、操作简便。且其造价低，体积小，适于实验室应用。

其缺点: 费时间，溶剂用量大，且需专门的索氏抽提器。

3.仪器和试剂

1)仪器

索氏提取器，恒温水浴锅，干燥器，分析天平(感量0.1mg)，电热鼓风干燥箱(温控103±2℃)

图7－1 索氏提取装置

1—冷凝管; 2—抽提筒; 3—滤纸筒;

4—虹吸管; 5—蒸汽路径; 6—圆底烧瓶

2)试剂

①无水乙醚或石油醚(分析纯)。

②中性干燥海砂。

4.操作方法

1)滤纸筒的制备

将大小8cm×15cm的滤纸，用直径约2cm的试管为模型，将滤纸以试管壁为基础，折叠成底端封口的滤纸筒，筒内底部放一小片脱脂棉。在105℃中烘2h，取出放入干燥器中，冷却至室温。

2)仪器的预处理

将索氏抽取器各部分充分洗涤并用蒸馏水清洗后烘干，接收瓶在(100±5)℃的电热鼓风干燥箱内干燥至恒重(前后2次称重差不超过0.002g)，取出放入干燥器中备用。

3)样品处理

①固体样品: 称取2.00～5.00g样品干燥，研细(可取测定水分后的试样)，必要时拌以海砂，全部移入滤纸筒内。

注: 固体样品用粉碎机粉碎后，颗粒大小通过40目筛即可。

②半固体或液体样品: 称取5.0～10.0g样品置于蒸发皿中，再加入海沙20g，于沸水浴上蒸干后，在(100±5)℃干燥，研细，全部移入滤纸筒内。蒸发皿及附有试样的玻璃棒，均用沾有乙醚的脱脂棉擦净，并将棉花放入滤纸筒内，再用脱脂棉线封捆滤纸筒口。

5.抽取

将装有样品的滤纸筒放入抽提筒中，连接已干燥至恒重的脂肪烧瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至接收瓶的2/3体积处。连接好抽提器各部分，接通冷凝水，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在65～80℃之间，使冷凝下滴的提取溶剂成连珠状(120～150滴/min或回流7次/h以上)，抽提至抽取筒内的乙醚或者石油醚用滤纸点滴检查无油迹为止(一般提取时长6～12h)。抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发(抽提室温以12～25℃为宜)。提取瓶中的乙醚或石油醚要做回收处理。

6.回收溶剂、烘干、称重

取下接收瓶，回收乙醚或石油醚，待接收瓶内乙醚剩1～2m L时在水浴上蒸干，再将接收瓶于(100±5)℃烘箱干燥2h，置于干燥器内冷却至室温后称重。重复操作直至恒重为止。

7.结果计算

式中: X——样品中粗脂肪的含量，g/100g;

M1——为接收瓶的质量，g;

M2——为接收瓶和脂肪的质量，g;

M——为样品的质量(如为测定水分后的样品，以测定水分前的质量计)，g。

8.说明及注意事项

①样品应干燥后研细，样品含水会影响溶剂提取效果，而且容易导致水溶性非脂成分析出。装样品的滤纸要严密，不能外漏样品，也不能包得过于严实而影响溶剂渗透。放入滤纸筒时高度不能超过回流弯道，否则超过弯道样品中的脂肪不能抽提，造成误差。判断抽提是否完全可用滤纸进行检查，由抽提管下口滴下的乙醚或石油醚滴在滤纸上。挥发后不留下油迹表明已抽提完全，若留下油迹说明抽提不完全。

②抽提用的乙醚或石油醚要求无水、无醇、无过氧化物，挥发残渣含量低。

③反复加热会因脂类氧化而增重，重量增重时，以增加的重量为恒重。

④在抽提时，冷凝管上端最好连接一支氯化钙燥管，如无此装置可塞一团干燥的脱脂棉球。这样可防止空气中水分进入，也可避免乙醚在空气中挥发。

⑤提取时水浴温度不可过高，以每分钟从冷凝管滴下80滴左右，每小时6～12次为宜，提取过程应注意防火。

⑥对含糖及糊精多的样品，要先以冷水使糖及糊精溶解，经过滤除去，将残渣连同滤纸一起烘干，放入抽提管中。

⑦由于乙醚是易燃、易爆物质，抽提室内要注意通风并严禁有火源。

⑧抽提用的乙醚中不得放置长时间，否则会产生过氧化物。

乙醚中过氧化物的检查方法是: 取适量乙醚，加入碘化钾溶液，用力摇动，放置1min，若出现黄色则表明存在过氧化物，应进行处理后方可使用。

除去过氧化物的方法: 将乙醚导入蒸馏瓶当中，加一段无锈铁丝或者铝丝，收集重蒸乙醚。