氯仿－甲醇提取法

索氏抽提法只能提取游离态的脂肪，而对脂蛋白、磷脂等结合态的脂类，则不能完全提取出来，酸水解法又会使磷脂水解而损失。而在一定水分存在下，极性的甲醇与非极性的氯仿混合液(简称CM混合液)却能有效地提取结合态脂类。本法适合于含结合态脂类比较高，特别是磷脂含量高的样品(如鲜鱼、贝类、肉、禽蛋等)，对于含水量高的试样更为有效。

1.原理

将样品分散于氯仿-甲醇混合液中，在水浴中轻微沸腾，氯仿-甲醇及样品中一定的水分形成提取脂类的溶剂，在使样品中组织中结合态脂类游离出来的同时与磷脂等极性脂类的亲和性增大，从而有效地提取出全部脂类，经过滤除出非脂成分，回收溶剂，残留的脂类用石油醚提取，蒸馏除去石油醚后即得脂肪。

2.仪器

具塞离心管; 离心机; 布氏漏斗; 具塞三角瓶。

3.试剂

①氯仿: 97%(体积分数)以上。

②甲醇: 96%(体积分数)以上。

③氯仿-甲醇混合液: 按2: 1体积比混合。

④石油醚(沸程30～60℃)。

⑤干燥无水硫酸钠。

4.测定方法

1)提取

准确称取样品5g，放入200m L具塞三角瓶中(高水分样品可加适量硅藻土使其分散，干燥食品加入2～3m L水) 加入60m L混合氯仿-甲醇溶液，连接冷凝管，于65℃水浴中加热，从微沸开始计时，提取1h。

2)回收溶剂

提取结束后，取下三角瓶，用布氏漏斗过滤，滤液用另一具塞三角瓶收集，用氯仿-甲醇混合液洗涤原锥形瓶，过滤器及滤器中试样残渣、洗涤液并入滤液中。并把锥形瓶置于65～70℃水浴中蒸发回收溶剂，至烧瓶内物料呈浓稠态(不能使其干涸)，冷却。

3)萃取、定量

冷却后，用移液管加入25m L石油醚溶解内容物，再加入无水硫酸钠15g，立即加塞振荡1min，将醚层移入具塞离心沉淀管进行离心分离5min(3000r/min)。用移液管迅速吸取离心管中澄清的醚层10m L于已恒重的称量瓶内，蒸发去除石油醚后，于100～105℃烘箱中干燥30min，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作直至恒重。

5.结果计算

式中: X——脂类的含量，g/100g;

M——试样质量，g;

M2——称量瓶与脂类质量，g;

M1——称量瓶质量，g;

2.5——从25m L石油醚中取10m L进行干燥，故乘以系数2.5。

6.说明及注意事项

①蒸馏回收溶剂时不能完全干涸，否则脂类难以溶解于石油醚中，使结果偏低。

②磷脂会被吸收到滤纸上，因此过滤时不能使用滤纸。

③在进行萃取时，无水硫酸钠必须在石油醚之后加入，以免影响石油醚对脂类的溶解，其加入量可根据残留物中的水分含量来确定，一般为5～15g。