塔玛亚历山大藻毒素粗提液对中国对虾肝胰腺和鳃含量的影响

肝胰腺和鳃的MDA含量在注射塔玛亚历山大藻毒素粗提液后表现出不同的变化趋势。肝胰腺MDA含量除染毒后的1 h被短暂抑制外，其他时间点与对照组相比无显著性差异（P . 0.05）。鳃中MDA含量整体呈现上升的变化趋势，除1 h外，其他时间点都显著高于对照组（P , 0.05）。

图19　塔玛亚历山大藻毒素粗提液对中国对虾肝胰腺和鳃组织GST活性的影响

图20　 塔玛亚历山大藻毒素粗提液对中国对虾肝胰腺和鳃组织MDA含量的影响

活性氧自由基中的超氧阴离子（O22）的寿命最长（文春根等，2009），可从产生位置扩散至较远的靶位置（张庆利，2007）。SOD 的功能是把O22歧化成H2O2和O2，是保护机体免受O22毒性的重要抗氧化酶，而GST具有清除体内自由基及解毒双重功能，参与催化有机过氧化物为相应的醇。本研究发现，注射塔玛亚历山大藻毒素粗提液后对虾肝胰腺和鳃组织的SOD和GST活性显著上升，与Gubbins 等（2000）研究石房蛤毒素（Saxitoxin，STX）以及有毒亚历山大藻（Alexandrium fundyense）的提取物对大西洋鲑鱼（Salmosalar）GST影响的结果相似，谭志军（2006）通过对鲈鱼（Lateolabrax japonicus）腹腔注射也发现，塔玛亚历山大藻毒素粗提液可以诱导鲈鱼肝脏和鳃的SOD和GST活性，并且发现塔玛亚历山大藻毒素对SOD活性的诱导在鲈鱼肝脏中没有明显的剂量效应，而在鳃中高剂量诱导效应低于低剂量的诱导效应。SOD和GST活性显著上升可能是塔玛亚历山大藻毒素在中国对虾体内的代谢过程中出现过多自由基，对虾组织反馈性增强抗氧化系统酶活性，以清除多余的自由基。同时也表明GST可能参与了塔玛亚历山大藻所产有毒物质的代谢及解毒过程（Gehringer et al，2004；Jeon et al，2008）。江天久等（2006）发现中国龙虾（Panulirusstimpsoni）在对PSP代谢过程中可能发生了GTX2，3向GTX1，4转换的过程，这种还原转化在双壳类和甲壳类的动态代谢中常有发生（Hiroshi et al，2002；Oikawa et al，2005），而这种化学转化可能与生物体内谷胱甘肽诱导相关（江天久等，2006；Hiroshi et al，2002；Oikawa et al，2005）。而GTX转换成STX也需要谷胱甘肽的参与（Setsuko et al，2000；Sato et al，2000）。中国对虾GST的上升是否是因为PSP在代谢过程中发生了上述转换引起还有待进一步研究。肝胰脏是藻毒素累积及解毒的主要器官（Montoya et al，1996），在解毒的过程中产生的大量自由基使肝胰腺SOD和GST活性在实验过程中处于较高的状态。Gehringer等（2004）研究表明微囊藻毒素进入动物体内，主要通过肝脏的谷胱甘肽还原机制解毒，这可能也是GST在实验过程中一直处于较高状态的一个原因。

生物膜（细胞膜、线粒体膜、溶酶体膜和内质网膜）是活性氧攻击的主要部位，膜磷脂富含多价不饱和脂肪酸，易发生脂质过氧化（Yin et al，2005）。MDA 是机体脂质过氧化作用的产物，其含量可间接反映机体的脂质过氧化水平以及机体细胞受自由基攻击的严重程度（陈汉等，2007）。中国对虾肝胰腺MDA含量除实验开始后的1 h被短暂抑制外，其余时间点与对照组相比均未出现统计学差异，表明中国对虾肝胰腺组织在本实验的注射剂量下没有发生脂质过氧化，诱导生成的活性氧在肝胰腺组织SOD 和GST等抗氧化物酶作用下被有效清除，阻止了它在肝胰腺中过多的积累，阻抑了膜脂过氧化，保护了膜系统及相关酶系统。而鳃中MDA含量除1 h外，其余各时间点与对照组相比都处于比较高的水平，表明对虾鳃发生了脂质过氧化。陈洋（2008）研究发现米氏凯伦藻（Kareniamikimotoi）未知毒素能使哺乳类细胞MDA含量明显升高，能够诱导细胞发生脂质过氧化。Creppy等（2002）研究也发现腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid，OA）能促进人肠内皮细胞发生脂质过氧化。MDA能与膜上蛋白质反应，使膜通透性增加，引起膜渗漏，从而使细胞器结构与功能发生紊乱（Li et al，2005）。多种功能膜和酶系统遭到破坏，致使组织SOD和GST等酶活性下降。在本实验中鳃组织SOD和GST的活性达到峰值后急剧下降，在12和48 h被显著抑制，可能就是鳃组织酶系统遭到破坏，抗氧化系统功能下降的结果。SOD和GST活性被抑制，间接反映了机体清除自由基的能力降低，能清除活性氧的抗氧化系统功能下降，将导致机体内活性氧更迅速累积，从而加剧膜脂过氧化作用，这可能是鳃中MDA含量整体呈现上升的变化趋势的原因。塔玛亚历山大藻对中国对虾的毒理机制之一可能是通过破坏机体氧化-抗氧化系统的平衡，引发对虾的脂质过氧化，从而造成组织的氧化损伤。鳃具有呼吸、渗透和酸碱平衡等重要功能（Evans et al，2005），鳃发生脂质过氧化可能引起鳃细胞功能和结构变化，从而影响虾体的正常生理代谢，使虾体的免疫力下降。本实验初步探讨了塔玛亚历山大藻毒素对中国对虾抗氧化酶活性的影响，其对抗氧化酶活性的剂量—效应关系在以后的研究中需进一步阐明，另外生物体内酶活性的变化只能间接反映毒素对生物造成应激效应的程度，要弄清楚塔玛亚历山大藻毒素对中国对虾的致毒机制还有待进一步研究。