微生物的培养

二、微生物的培养

1．静置培养

是最常用的培养方法，即将已接种的试管、三角瓶、培养皿等待培养物置恒温箱或恒温室中进行培养。对于环境中一般中温型腐生菌常用25～30℃培养，致病菌则放37℃中培养。注意培养时需将培养皿倒置，使皿盖在下，以减少水分散失及杂菌污染。

2．振荡培养

培养需氧性微生物液体时，除采用浅层培养液静置培养外，尚可置振荡装置上培养以利通气。振荡机（或称摇瓶机、摇床）市面有售。当培养物量大时，可将摇床安装在恒温室中进行培养；量小而少时，则可利用恒温振荡器或小型振荡器置恒温水溶液中进行培养。根据培养对象选择振荡方式与速度。

3．通气培养

当培养大量的需氧微生物或培养藻类等需获取空气中的CO₂、N₂等营养时，可进行通气培养。

4．厌氧培养

（1）深层液体培养法：此法最为简易，但厌氧条件不够严格。方法是在试管或三角瓶中装2/3高度的培养液，接种后，液面滴加一层熔化的石蜡油，塞紧管口，进行培养。

（2）倒扣培养皿法：将菌液与融化后的琼脂培养基充分混匀后，使之凝固于培养皿盖上，然后将培养皿底倒置于培养基上，进行培养。

（3）碱性焦性没食子酸法：此法吸氧能力强，又不需特殊装置，故广泛用于创造厌氧条件（图8－3）。

图8－3　焦性没食子酸法（一）

将待培养物放入真空干燥器内。

按每100ml培养物需焦性没食子酸（pyrogallol）1g及2．5mol/L NaOH10ml计算，将焦性没食子酸与NaOH装入玻瓶，混合成碱性焦性没食子酸，置上述干燥器内可吸收容器中的氧气。

同时将厌氧指示剂（见附注1）加入试管煮沸至无色，置干燥器内。如容器内为厌氧环境，指示剂保持无色，如为氧化环境则指示剂变为蓝色。

立即盖紧干燥器盖子，密封。

用真空泵抽去空气，置恒温下进行培养。

（4）钢丝棉法：取市售的零号或1号钢丝棉10g，浸入500ml钢丝棉活性溶液中（见附注2），使钢丝棉充分浸泡至溶液呈暗灰色，铜的颜色消失。钢丝棉变为红铜色，轻轻澄干水。此时钢丝棉吸氧能力极强，称活性钢丝棉。

将活性钢丝棉、饱和重碳酸钠水（见附注3）、待培养物及装有厌氧指示剂的试管一起放入真空干燥器内。

密封干燥器，用真空泵抽去干燥器内的空气，送恒温室进行培养。

（5）化学还原法：利用还原作用强的化学物质将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原型物质，降低氧化－还原电势。李伏夫（B M Jibbob）法就是用二亚硫酸钠和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式为：

Na₂S₂O₄＋Na₂CO₃＋O₂→Na₂SO₄＋NaSO₃＋CO₂

取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内（如系液体培养基，则直立于罐内），最上端保留可容纳1～2个平皿的空间（视玻璃罐的体积而定），按玻璃罐的体积每1 000cm³空间用亚硫酸钠及碳酸钠各30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。若用无盖玻璃罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻璃罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭（图8－4）。

图8－4　李伏夫氏厌氧培养法

（6）厌氧工作站法：在操作严格、具备实验条件的情况下，可在厌氧工作站里进行接种和培养操作。厌氧工作站见图8－5。

图8－5　厌氧工作站