方法与结果

6.1.3.1　色谱条件

安捷伦C18柱，150 mm×4.6 mm×0.5 μm；流动相：甲醇-水（80∶20），流速：0.8 mL·min－1；波长：220 nm；柱温：20 °C。

款冬酮理论塔板数不得低于5 000。

6.1.3.2　对照品溶液的制备

精密称取（减压干燥）款冬酮对照品3.50 mg，置于25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置于20 mL 容量瓶中，加甲醇制成0.035 mg·mL－1的溶液。

6.1.3.3　供试品溶液的制备

取款冬花样品粉碎（过20 目筛），60 °C干燥至恒重，分别精密称取上述样品各10.0 g，置于索氏提取器中，加石油醚（60～90 °C）100 mL，回流提取3次，时间2 h，1 h，1 h（去掉脂溶性杂质），滤渣用甲醇提取3次，每次100 mL，时间2 h，1 h，1 h，用微孔滤膜0.22 µm（滤纸过滤）过滤，浓缩，滤液定容于50 mL容量瓶中，摇匀，作为样品溶液，备用。

对照品与供试品的HPLC图谱如图6.1所示。

（a）款冬酮对照品

图6.1　款冬酮对照品与供试品的HPLC图谱

6.1.3.4　标准曲线的绘制

称取款冬酮标品1.75 mg，用色谱纯甲醇配成50 mL，即得0.035 mg·mL－1的标准品溶液。取其溶液2，5，10，15，20，25 µL进行测定，绘制浓度-峰面积曲线（图6.2）。线性范围：0.070～0.875 2 µg。

款冬酮标准曲线：Y＝1 533.8X－1.459 9，R2＝0.999 8。

图6.2　款冬酮标准曲线

6.1.3.5　稳定性试验

取供试品溶液，室温下每6 h进样分析1次，连续测定5次，款冬酮平均峰面积的RSD为1.39%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

6.1.3.6　精密度试验

精密吸取上述0.035 mg·mL－1的对照品溶液，连续进样5次，每次10 µL，款冬酮峰面积的RSD为1.01%。表明测定结果的精密度良好。

6.1.3.7　重复性试验

分别精密称取同一批栽培款冬花5份，照6.1.3.3项下方法操作，测定峰面积并计算，得峰面积和含量的RSD均小于1.36%。

6.1.3.8　加样回收率

分别精密称取1 mL已知含量的同一批次样品5份，每份精密加入款冬酮对照品溶液0.2 mL（0.035 mg·mL－1），按6.1.3.3项下方法制备供试品溶液，照上述方法测定。分别测得不同产地的款冬花样品加样回收范围在97.80%～102.8%（表6.2）。

表6.2　不同产地款冬花样品回收率