杂交育种方法

（二）杂交育种方法

1.亲本选择

从大量野生或其他各地菌株中选出和杂交相匹配的亲本，种菇的采集和选择一定要有数量、有代表性。

2.培养单核菌株

从选定的杂交亲本中分离出大量单孢子。单孢子分离知识参阅本章单孢分离法。之后将担孢子于适宜环境中培养，从而获得单核菌丝。

3.标记单核菌株

单核菌丝没有锁状联合，而杂交后产生的双核菌丝具有明显的锁状联合，因此，可以根据这个特点从形态上对单核菌丝进行标记。

4.杂交配对

用“单×单”或“单×双”方式将亲本单核菌株两两配对杂交。

（1）单×单杂交

在平板培养基上接入杂交亲本的单核菌丝各1块，距离为2厘米，在适宜的温度下培养。当两单核菌丝发生接触时，用解剖镜检查接触处的菌丝体是否已经双核化。

（2）单×双杂交

在平板培养基上，分别接种单核菌丝体和双核菌丝体各1小块，两者相距约1厘米，在适宜温度下培养。当单、双核菌落刚接触时，挑取远离双核菌丝体一侧的单核菌落边缘上的菌丝进行镜检，检查接触处菌丝是否已经双核化。

5.扩繁、鉴定

用接种针将镜检确认为双核化的菌丝体挑取1小块（肉眼可见即可）移接到新的试管培养基上培养，保存备用。对转管培养的菌落利用前述的单核菌丝形态标记技术进行进一步的镜检和拮抗试验，确认其是否属于真正的杂交种。四极性异宗结合的食用菌，由于自交不育，经配对后，凡出现双核菌丝的组合，并能正常结实者，即证明杂交成功。此外，还可通过比较亲本双核菌丝和杂交的双核菌丝的过氧化物酶和酯酶谱的差异性来判断是否杂交产生了新菌株。

6.筛选、示范推广

将杂交成功的菌株进行初步比较试验，通过菌丝生长速度、抗杂菌能力、现蕾期、首潮菇采收时期、有无畦形菇、子实体表型特征、最适生长温度、湿度、子实体的产量等指标，淘汰大部分表现一般的菌株；再经过进一步的比较试验，选出少数具有明显优良性状的菌株。之后进行大面积生产试验，逐步扩大栽培面积，进行示范性的推广，将种性优良、优质高产的菌株逐渐定为当家菌株。为确定保留下来的杂交新品种正式定名，并申请有关部门批准。