结核阳性牛病料采集和保存

第一节　结核阳性牛病料采集和保存

检查牛分枝杆菌，应采集异常淋巴结和实质器官，如肺、肝、脾脏等材料。对结核菌素反应阳性而没有病变的动物，应采集下颌、咽喉、支气管、纵隔、乳房及一些肠系膜淋巴结和肝脏进行检查和培养。收集样品的容器应干净无菌，若可能就用一次性塑料容器，容量50ml，适于装各类不同样品。

一、采样时间

内脏的采集，须于死亡后立即进行，最好不要超过6小时，时间过长会导致其他细菌侵入，尸体进而腐败，影响病原微生物的检出。

二、器械消毒及准备工作

刀、剪子、镊子、针头等煮沸消毒30分钟；器皿高压灭菌；一次性注射器，灭菌试管，采样杯；采集一种病料使用一套器械和容器，不能混用。采样人需着防护服，戴手套、口罩进行操作。

三、采样部位

根据感染部位选择病料。将病健结合部（此部位细菌活力最强），例如肺、肾等采取1～2cm³小方块，置于灭菌试管或平皿中，贴标签，填写采样单；采集血清需采用一次性采血器吸取血液10ml，置于灭菌试管中，待凝固后将血清置于另一个灭菌小瓶，注明编号，统计采样资料，填写采样单；采集乳汁时需要先消毒乳房，弃去最初所挤的3～4股乳汁，然后再集10ml乳汁于灭菌试管中，标号，填写采样单；肠道的采集，用线扎紧一段肠道（6cm）两端，然后将两端切断，置于灭菌器皿中，标号后，填写采样单。

四、结核病病料保存

病料的保存可用超低温冷冻保存方法，采样杯的杯身和垂线末端可用标签将采样日期、采样部位、采样数量、采样人标出，同时将资料汇总，填写采样单。

送实验室的邮件，必须加垫、密封，以防溅漏。包装要合适，以防运送中破损。样品快速及时送到实验室，可增加牛分枝杆菌的培养复活机会。但是，如不能及时送到，应将样品冷冻或冻结，防止污染菌生长，在温暖环境下，可加硼酸（最终浓度为0．5%）作抑菌剂。所有操作包括培养都应在生物安全柜内进行。