动物死亡率测定方法

四、测定步骤

1.给药

动物随机分组后，准备给药。灌胃或口服给药前宜禁食。大鼠禁食10～16h，小鼠禁食3～5h，因为不禁食会影响给药量和药物吸收，而禁食过久会使药物代谢率明显加快，产生不期望的作用。禁食时不禁水。其他给药途径不必禁食。大鼠给药体积为10mL／kg，但水溶性药液灌胃可达20mL／kg。小鼠灌胃给药体积为30mL／kg。给药体积宜小不宜大。

给药次数一般采用一次给药法。如果毒性很小可采用24h内多次结药法，但不宜超过24h给药。每次给药之间宜间隔3～4h。给药后继续停食1～2h。但是，当24h内给多次药时，因停食时间太长会影响结果，所以，酌情供给动物饲料。给药期间不禁水。

2.观察和检查

给药后立即观察动物中毒症状，随后每隔4h检查一次，24h后每天检查一次直至14 d结束。致死率的检查次数尽量频繁，检查和记录内容尽量详细，记录药物任何毒性反应，如皮肤、毛发、眼睛、鼻黏膜、口、自主活动、中枢神经系统（CNS）症状，行为或其他任何异常表现。详见表3-4和表3-5。

动物体重测定在给药前、死亡时和试验结束时分别进行。中途死亡的动物和试验结束的全部动物都应解剖，尽量详细检查和描述解剖的脏器和组织，如脏器重量、颜色、体积大小，尤其对那些中期死亡的动物应进行更仔细的检查受损部位和可能死亡原因。对于损伤的器官和组织应浸泡于10%甲醛水溶液中，固定后作病理学检查。组织病理学检查有助于确定靶标器官毒性和毒性程度，但该项检查很费时，因此，非常认真仔细的肉眼检查可减少该项检查的内容。急性毒性死亡原因主要是神经、心血管、呼吸系统、肝、肾等部位，应特别慎重检查。给药后死亡时间尽可能记准确。

表3-4　近似LD₅₀试验临床表现和观察指标

续表

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3.数据处理

将全部数据按各剂量组分别综合成表格形式，包括动物死亡时间和死亡率、毒性反应种类、解剖后肉眼检查结果和病理学检查结果分别进行总结和分析。

按公认的统计方法计算LD₅₀以及各项毒性反应。可采用移动平均法、Bliss法或Finneys法进行统计处理。现在用计算机统计很方便。

4.结果评价

近似LD₅₀值是一种相当粗的半数致死剂量的测定，但它对受试物毒性分级、毒性靶标器官、异常现象的发生率和严重程度具有重要的参考价值。