任务2 灭菌技术
1．干热灭菌
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。灭菌温度为140～160℃维持2～3h，但不能超过180℃。
1）步骤
（1）放入待灭菌物品：将包好的待灭菌物品（培养皿、试管、吸管等）放入烘箱内，物品不要摆放太挤，以免妨碍热空气流通。同时，灭菌物品不要与烘箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦起火。
（2）升温：接通电源，打开开关和排气孔，调节恒温调节器，让温度逐渐上升。当温度上升至100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，若绿灯熄灭红灯亮，表示箱内停止升温，此时如果还未达到所需温度，则需再调节恒温调节器使绿灯亮，如此反复调节，直至达到所需温度。
（3）恒温：当温度升到160℃时，利用恒温调节器的自动控制，保持此温度2h。
（4）降温：切断电源，自然降温。
（5）开箱取物：待烘箱内温度降到60℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。
2）注意事项
（1）电烘箱的温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至会引起燃烧。
（2）干热灭菌由于穿透力弱，温度不均匀，且灭菌温度过高，所以使用受限，仅适用于玻璃器皿、金属用具等耐热物品的灭菌，而培养基、橡胶制品、塑料制品等都不能用干热灭菌。
（3）开箱取物时若温度未降到60℃，切勿自行打开箱门，以防骤然降温导致玻璃器皿炸裂。
（4）灭菌后的器皿在使用前勿打开包装纸，以免被空气中的杂菌污染。
2．高压蒸汽灭菌
实验室中常见的高压蒸汽灭菌锅有立式和手提式，灭菌条件为121℃、0．105MPa、20～30min，其构造如图2－10。
图2－10 高压蒸汽灭菌锅
（a）手提式高压蒸汽灭菌锅；（b）立式全自动高压蒸汽灭菌锅
1）步骤
（1）加水：打开灭菌锅盖，向锅内加入适量的水，使水面与三角支架相平为宜，若是立式灭菌锅，则是加至高水位灯亮。
（2）装料：将待灭菌物品装入灭菌桶内，注意物品不要堆放太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
（3）加盖：手提式灭菌锅需将盖上的排气管插入灭菌桶的内槽，再将锅盖紧闭，勿使漏气。
（4）排气：接通电源开始加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气，待大量蒸汽冒出5～10min后，冷空气即已排尽，此时关上排气阀。
（5）升压、保压、降压：将排气阀关闭后，灭菌锅即形成一密闭的容器，锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。观察压力表，当锅内压力升到所需压力时，开始计时，维持压力至所需时间。待到达灭菌的时间后，关闭电源，停止加热，让其自然降压冷却。
（6）开盖取物：待压力表的指针降至“0”时，先打开排气阀，再打开锅盖，立即取出灭菌物品。斜面培养基取出后要趁热摆成斜面，灭菌后的玻璃器皿需晾干。
（7）排水：灭菌锅使用完后，应将锅内剩余的水排放掉，以防生锈。
2）注意事项
（1）在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排除，否则，即使压力达到所需的压力（0．105MPa），但温度没有达到所需的温度121℃，结果造成灭菌不彻底。
（2）降压时不可过早打开排气阀，防止锅内压力突然下降，玻璃器皿内的液体或培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶口或试管口，使棉塞沾污培养基而易发生污染。
（3）灭菌结束后，放气降压完毕，要趁灭菌锅未冷及早打开，取出灭菌物品，不要久放于灭菌锅内，以免水蒸气凝结在灭菌锅的顶盖和四壁形成水滴，滴落到被灭菌的物品上，增加灭菌物品的染菌概率。
3．过滤除菌
过滤除菌常用于空气除菌和不宜加热灭菌的培养液的除菌。
1）空气除菌
实验室中，一般将棉纤维或玻璃纤维固定于超净工作台、无菌箱等设备上。然后借助鼓风机将空气吹过棉纤维或玻璃纤维，即可获得无菌空气。
2）液体除菌
用于液体除菌的滤菌器的种类较多，但使用方法及注意事项基本相同，过滤除菌抽气装置见图2－11，具体操作步骤如下。
（1）滤菌器的检查：滤菌器在安装前，应检查有无裂痕。其方法是先将滤器与空压机相连接，然后将滤器投入水中，压入空气以检查有无明显漏气现象，如有大量气泡产生，即证明有裂痕，不得使用。
（2）清洗与灭菌：将清洗干净后的滤菌器进行包扎灭菌。
（3）安装：以无菌操作进行滤器和滤瓶的安装，并使滤瓶的侧管与抽气机相连（或中间接压力计及缓冲空瓶）。
（4）抽滤：把滤液倒入滤器，开动抽气装置，使滤瓶中的压力渐减，滤液流入滤瓶（或滤瓶中的无菌试管）中，滤毕，将抽气管从滤瓶侧管处拔下，关闭抽气装置。
（5）在无菌操作下，开启滤瓶的橡皮塞，迅速取出瓶中的滤液移放在无菌玻璃器内；若滤瓶中已装有试管，则将盛有滤液的试管取出加塞即可。
（6）滤器用毕后可先在消毒液中浸泡，再用毛刷清洗去除所附蛋白质及其他污物，而且还应反向压入清水，充分洗涤、干燥后用纸包裹，灭菌后备用。
图2－11 过滤除菌抽气装置
3）注意事项
（1）在进行过滤除菌前，先将整个滤器和接收器皿装置好后，须预先经过高压蒸汽灭菌。
（2）整个过滤除菌操作应严格地在无菌条件下进行，以防污染。
（3）过滤时应避免各连接处出现渗透现象。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
