医学蠕虫实验

时间：2022-05-13 理论教育版权反馈

【摘要】：注意受精蛔虫卵与未受精蛔虫卵的区别、脱膜受精蛔虫卵与钩虫卵的区别。粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。要取得准确的结果，粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24h。盛粪便的容器要洁净、干燥，并防止污染；粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果。用竹签挑取花生粒大小的粪便，置于青霉素小瓶中与饱和盐水充分搅匀。但比重略大于1的原虫包囊、钩虫卵用此法效果欠佳。

实验任务五　医学蠕虫实验

子任务一　线虫实验

实验目的

（1）能识别常见线虫成虫的形态特征。

（2）学会镜下观察常见线虫卵、两种微丝蚴、旋毛虫囊包的形态结构。

（3）初步学会粪便直接涂片法、饱和盐水浮聚法及肛门拭子法的操作步骤。

（4）初步学会厚血膜的制作。

实验计划

1.实验材料

光镜、常见线虫成虫大体标本、虫卵玻片标本、丝虫微丝蚴及旋毛虫囊包玻片标本；载玻片、盖玻片、竹签、粪便、生理盐水、氯化钠、蒸馏水、温箱、烧杯、青霉素小瓶、吸管、透明胶带纸、剪刀、试管、滤纸、记号笔、玻棒、棉签等。

2.实验步骤

1）形态观察（示教）

（1）成虫大体标本观察：观察成虫大小、形态、颜色，注意雌虫、雄虫的区别。

（2）虫卵形态观察：观察虫卵的形状、大小、颜色、卵壳厚薄、卵内容物及其卵细胞与卵壳的关系。注意受精蛔虫卵与未受精蛔虫卵的区别、脱膜受精蛔虫卵与钩虫卵的区别。

（3）丝虫微丝蚴形态观察：高倍镜下观察两种微丝蚴（染色玻片标本）的大小、形态、头间隙、体核的形态与排列及尾核的有无等特征，注意两者的区别。

（4）旋毛虫囊包的形态观察：低倍镜下观察旋毛虫囊包的形状，旋毛虫囊包内幼虫的形态、大小等特点。

2）线虫常用的检查方法

粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。要取得准确的结果，粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24h。盛粪便的容器要洁净、干燥，并防止污染；粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果。

（1）粪便直接涂片法（操作）：滴1滴生理盐水于洁净的载玻片中央，用竹签或牙签挑取粪便约绿豆大小，与载玻片上的生理盐水混匀。将粪液涂成薄膜，低倍镜下检查，见到可疑者，再转高倍镜下详细观察，如用高倍镜观察，需加盖盖玻片。

注意事项：粪便涂片不宜过厚或过薄，一般应以透过粪膜可辨认书上字迹为宜。由于涂片取粪量较少，镜检时必须按一定方向和顺序将全部涂片标本查完，防止漏检，通常每份粪便标本应从不同部位取材，涂片3张，可提高检出率。镜检时注意将寄生虫卵与粪便中残渣及酵母菌、动物细胞、植物细胞、纤维等相区别。

（2）饱和盐水浮聚法（操作）：①实验原理：增加液体的比重，使比重较轻的虫卵在比重较大的液体中浮聚于液体表面，达到浓集虫卵的目的。②饱和盐水的配制：将食盐徐徐加入盛有沸水的容器内，不断搅动，直至食盐不再溶解为止，冷却备用。③操作步骤：取洁净的青霉素小瓶，加入一吸管饱和盐水。用竹签挑取花生粒大小的粪便，置于青霉素小瓶中与饱和盐水充分搅匀。再慢慢加入饱和盐水至液面略高于瓶口，但不溢出为止。此时在瓶口覆盖1片载玻片，静置15min后，将载玻片垂直向上提起并迅速翻转，镜检（图10－8）。

图10－8　饱和盐水浮聚法示意图

（3）肛门拭子法（示教）：本法适用于蛲虫卵和牛带绦虫卵的检查。操作步骤：①棉签拭子法：先将棉签浸泡在生理盐水中，取出时挤去过多的盐水，在肛门周围擦拭，随后将棉签放入盛有饱和盐水的试管中，用力搅动，迅速提起棉签，弃去，再加饱和盐水至试管口处，覆盖1片载玻片，务必使其接触液面，5min后取载玻片镜检。也可将擦拭肛周的棉签放在盛清水的试管中，经充分浸泡，取出，弃去。试管静置10min或经离心后，倒去上层液，取沉渣镜检。②透明胶纸法：用长约6cm、宽约2cm的透明胶纸粘贴肛门周围的皮肤，慢慢取下胶纸，将有胶面平贴玻片上，镜检。

（4）钩蚴培养法（示教）：①实验原理：根据钩虫卵在适宜条件下可在短时间内孵出幼虫而设计的方法。②操作方法：加冷开水约1mL于洁净试管内，将滤纸剪成与试管等宽但较试管的高度稍长的“T”字形纸条，用铅笔书写受检者姓名或编号于横条部分。取粪便0.2～0.4g（约半粒蚕豆大小），均匀地涂抹在纸条的上部2/3处，再将纸条插入试管，下端浸泡在水中，以粪便不接触水面为度。在20～30℃条件下培养。培养期间每天沿管壁补充冷开水，以保持水面位置。3d后用肉眼或放大镜检查试管底部。钩蚴在水中常做蛇形游动，虫体透明。如未发现钩蚴，应继续培养观察至第5天（图10－9）。

图10－9　钩蚴培养法示意图

（5）血液检查微丝蚴（示教）：从血液中查找微丝蚴是诊断丝虫感染的主要方法。因微丝蚴有夜现周期性，采血时间以晚上9时患者入睡后为宜，常用的方法如下。①新鲜血片检查：取耳垂或指尖血1大滴于载玻片上，加盖盖玻片，在低倍镜下观察微丝蚴在血中卷曲摆动情况。②厚血膜法：取末梢血3滴制成厚血片，干后溶血、镜检，经染色镜检可避免漏检。

实验实施

（1）实验途径：①实验形式：示教/操作。②操作形式：分组操作（4～6人/组）。

（2）实验结果：记录实验结果及实验过程中出现的问题。

（3）实验报告：绘出蛔虫卵（受精蛔虫卵、未受精蛔虫卵）、钩虫卵、蛲虫卵，并注明各部分名称；写出粪便直接涂片法、饱和盐水浮聚法的操作步骤、实验结果，并对实验进行分析。

实验评价

实验结果与分析。

子任务二　吸虫实验

实验目的

（1）能识别常见吸虫成虫的形态特征。

（2）学会镜下观察常见吸虫卵的形态特征。

（3）能识别日本血吸虫、华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫、布氏姜片吸虫的中间宿主或媒介植物形态特征。

（4）初步认识沉淀集卵法、毛蚴孵化法的操作方法。

实验计划

1.实验材料

光镜、常见吸虫成虫大体标本与玻片标本、虫卵玻片标本；吸虫中间宿主或媒介植物大体标本；载玻片、盖玻片、竹签、粪便、蒸馏水、40～60目铜筛、锥形玻璃量杯、烧杯、离心机、三角烧瓶、温箱、玻璃棒、抗血清、吸虫卵、石蜡等。

2.实验步骤

1）形态观察（示教）

（1）吸虫成虫大体标本观察：肉眼观察吸虫成虫的固定标本，注意观察吸虫虫体的大小、形态、颜色、雌虫与雄虫合抱状态及雌虫与雄虫的区别。

（2）吸虫成虫玻片标本观察：肉眼观察吸虫虫体的大小、形态、口吸盘、腹吸盘、生殖系统的特征、雌虫与雄虫合抱状态等。

（3）虫卵形态观察：低倍镜下观察虫卵的形状、大小、颜色、卵壳及卵盖、卵内容物的特征。

（4）中间宿主大体标本观察：注意观察豆螺、沼螺、川卷螺、钉螺的形态、大小、颜色、表面结构及外形特征；认识淡水鱼、淡水虾、溪蟹、蝲蛄的外形特征；认识菱角、荸荠、茭白等水生植物。

2）吸虫常用检查方法

除粪便直接涂片法外，吸虫还有以下常用检查方法。

（1）沉淀法（示教）：因虫卵的比重比水大，故可用自然沉淀、离心沉淀的方法处理，使虫卵沉降于容器的底部，浓集虫卵，提高检出率。①自然沉淀法：以玻璃棒挑取粪便20～30g，通过40～60目铜筛调匀、滤入盛满清水的锥形玻璃量杯中，静置25min，倾去上层粪液，仅留沉淀物，再加满清水，每隔20min换水1次，反复3～4次，直至上层液体澄清为止。最后倾去上层液体，取沉淀物于载玻片上镜检。但比重略大于1的原虫包囊、钩虫卵用此法效果欠佳。②离心沉淀法：将粗渣滤去后的沉淀液置于离心机的离心管中，以1 500～2 000r/min的转速离心1～2min，倾去上层液体，再加清水与沉淀物混匀，如此反复3～4次离心，直至上层液体清澈为止，倾去上层液体，取沉淀物于载玻片上镜检。

（2）毛蚴孵化法（示教）：取患者粪便约30g，先经沉淀法集卵处理，将所得的沉淀物倒入500mL的三角烧瓶内，加清水至瓶口，将三角烧瓶置于25～30℃条件下进行孵化，4～6h后用肉眼或放大镜观察结果，如见水面下有白色点状物做直线来往游动，即是毛蚴。毛蚴运动特点：向光、向上做直线运动。必要时可用吸管将毛蚴吸出，置于载玻片上，在光镜下鉴别（图10－10）。