单核细胞增生性李斯特菌

六、单核细胞增生性李斯特菌

单核细胞增生性李斯特菌（Listeria Monocytogenes，LM，简称李斯特菌）是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李斯特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。该菌广泛存在于自然界中，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。人主要通过食入奶酪、牛乳、冰激凌、肉制品、未充分加热的鸡肉、热狗、生牛排、羊排、鱼类及蔬菜等而感染，占85％～90％的病例是由被污染的食品引起的。LM在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。

1．常规分离鉴定技术

（1）细菌学检查：食品、水等相关食源性标本检测按照GB4789．30-2003方法进行。其他标本直接分离于TSA-YE或其他李斯特菌选择性琼脂平板，在好氧环境下培养，30℃培养24～48小时后，选择典型菌落进行生化鉴定及动力试验。

（2）小鼠毒力试验和协同溶血（CAMP）试验：按照GB4789．30-2003方法进行。

（3）毒力基因鉴定：包括Hly，PlcA，PlcB，ActA，PrfA，Inl，Iap和Mpl等。以上基因检测，均可使用PCR方法进行。所用引物，可采用国际、国内或著名刊物公开发表的引物。

（4）PCR检测LM菌：Bessesen以PCR检测95株LM，结果全部阳性，而12株李斯特菌属其他菌株及12株非李斯特菌属的菌株均为阴性。Graham等以16S／23SrRNA基因中间保守区域为靶序列，用PCR技术对LM的特异性进行研究，经引物扩增产生区别于其他革兰阳性菌及革兰阴性菌的590 bp、340 bp片段，为LM的特异性检测提供了依据。

2．流行病学调查分型方法

（1）血清型分型：根据菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，将LM分成16个血清型，分别是1／2a，1／2b，1／2c，3a，3b，3c，4a，4b，4ab，4c，4d，4e，5，6a，6b和7。致病菌株的血清型一般为1／2a，1／2b，1／2c，3a，3b，3c，4a，4b和5，方法为血清学玻片凝集试验。Bhunia等利用淋巴细胞杂交瘤技术，制备了一株能稳定分泌抗LM的特异性单克隆抗体的细胞株，用此抗体建立的ELISA方法能于20～24小时内检测不同血清型的单增李斯特菌，法国梅里埃公司以ELISA原理制备现成试剂条在免疫分析仪上应用，效果明显，大大缩短了检测时间。但ELISA方法的检测范围在10⁵～10⁶CFU／ml，要得到可靠的结果必须先进行选择性增菌。

（2）脉冲场电泳分型：Brosch等以PFGE法分析176株LM，通过比较认为，LM的血清型可被其PFGE图谱反映。Ojeniyi等研究发现LM的PFGE和核糖体分型具有合适的流行病学标志，而血清分型和噬菌体分型却没有有用的流行病学标志。Kerouanton等比较了血清分型、酶电泳分型、RAPD分型及PFGE分型方法对35株LM的分型能力，结果表明PFGE的分辨率最高。这提示PFGE分型法对区分流行病学上难以分辨来源的LM是十分有用的。

（3）随机引物扩增DNA多态性分析分型技术：Jacquet通过对RAPD图谱的比较发现1992年法国和瑞士暴发的李斯特菌病的LM分离株相似。Byun等以RAPD法分析了来自于韩国（8株）、中国（10株）、美国（17株）和丹麦（10株）的LM分离菌株，结果表明韩国和美国的牛肉分离株，韩国和丹麦猪肉分离株高度同源，而中国的禽肉分离株与美国的牛肉分离株有一定的同源性。但是由于采用的引物短，T值低，扩增结果易受外界因素的影响，实验的重复性较差。