实验常用动物的基本操作要领

实验四　实验常用动物的基本操作要领

一、实验目的

1.熟悉动物实验中常用手术器械的使用方法。

2.掌握家兔手术操作的基本技能。

二、实验原理

生理学动物实验中，每种实验器械都是为满足某一方面的实验所设计的，规范使用这些器械，便能最大程度地发挥这些器械的功能，否则可能导致实验无法进行，器械的损坏或使用寿命减短。掌握一定的实验技能有利于以后手术操作的开展，并有利于实验取得理想的结果，否则，可能导致实验进展缓慢，甚至实验的失败。

三、实验对象

家兔（雌雄不限，体重约2.5kg）。

四、实验器材

20mL注射器1支、1mL注射器1支、粗剪刀1把、组织剪1把、眼科剪1把、动脉插管1个、静脉插管1个、输尿管插管1个、兔台1个、止血钳4把、镊子1把、眼科镊1把、气管插管1个、污物缸1个、动脉夹1个、玻璃分针和棉线若干。

五、实验药品

生理盐水、肝素（200U/mL）、20%氨基甲酸乙酯（乌拉坦）。

六、实验步骤和观察项目

1.抓取

一只手抓住家兔颈背部皮肤，并轻轻提起，另一手迅速托起其臀部，有些家兔会出现乱抓、肢体扭动和头部晃动等不配合动作，可轻抚其背部，待其恢复平静后再行抓取。

2.称重

将家兔放到婴儿称上称重，按千克读数，并记录其体重。

3.麻醉

（1）用注射器抽取麻醉药20%氨基甲酸乙酯，家兔注射剂量按5mL/kg计算。

（2）找到家兔的耳缘静脉，耳缘静脉位于耳背面外侧缘，此处兔毛稀疏，很容易看到一条浅而粗的血管，动手拔掉兔毛，用手指轻弹使血管扩张便于穿刺。

（3）固定家兔的耳朵。一只手食指和中指尖夹住静脉的近心端，拇指和无名指紧夹住静脉远心端，绷紧家兔耳朵。

（4）静脉注射。注射前一定要排空注射器内的气泡，注射部位以远心端开始为宜，注射时针头斜面和针管刻度向上，便于随时掌握注射药量，针尖以与血管呈15°～20°角刺入，穿刺成功后，将拇指置于针头上，把兔耳与针头牢固捏在一起，放松食指和中指，当回抽有血或阻力小时，表明注射器已经插入血管，可以注射药物了。注射时要注意检查家兔的麻醉程度，先检查浅反射，检查的方法是用组织剪剪一段家兔的胡须，然后将胡须轻触家兔的角膜，如果家兔眨眼，说明麻醉尚浅，应继续注药，直到角膜反射消失。然后检查深反射，又称夹趾反射，检查方法是先用止血钳夹家兔后肢的脚趾，当家兔没有缩腿反应，表明夹后趾反射消失，再用止血钳夹前趾，当夹前趾反射刚好消失，并且呼吸变的深而慢，表明麻醉成功。

4.固定

家兔仰卧位固定于兔台上，在兔台的四个角用线绑住家兔的四肢，再取粗线一条，线一端挂家兔门牙，另一端挂于兔台的竖杆上，以固定家兔头部。

5.颈部备皮

首先扪及甲状软骨及气管，自甲状软骨下8cm，气管两侧4cm区域的兔毛全部剪掉。剪毛应避免剪伤皮肤，具体操作方法是一手将皮肤绷平，另一只手持粗剪刀平贴于动物皮肤并逆着其毛发生长的方向剪毛，剪下的毛应及时放入污物缸中，以免到处飞扬。

6.暴露气管

手术者持两把止血钳夹住气管两侧的皮肤并提起，用另外一只手持组织剪于提起皮肤正中部位剪一1cm长小口，然后用止血钳插入切口将皮肤与皮肤下面的组织游离，进一步扩大切口到长度为甲状软骨下7cm长。仔细观察家兔颈部结构（如图1－4－1），用止血钳钝性分离气管上面的皮下组织、胸骨舌骨肌和胸锁乳突肌，游离一段大约5cm长的气管，并在气管下穿一根手术线备用。

7.气管插管

用镊子柄将气管垫起，在甲状软骨下第三与第四软骨环之间做一横向切口，切口大小是气管管径的1/3～1/2，再由切口中间开始向上做一纵向切口，使切口总体呈“⊥”形，然后将气管插管斜面向下向肺脏方向插入气管插管，插入深度为2～3cm，然后用手术线横向固定气管插管，此即为第一次打结，再将线的另外一端在气管插管分叉处绕几圈，跟另外一端再次打结，此即二次固定，防止插管滑脱。

8.颈部血管与神经的游离

用一只手的食指与拇指捏住颈部一侧的皮肤，用另外3个手指将皮层垫起，用另外一只手的手指轻触家兔颈部的皮肤，即可感觉到颈部脉搏的跳动。拿玻璃分针直的一端将筋膜拨开，即可看见颈总动脉与神经共同存在于一个动脉鞘内，先仔细观察神经血管的相对位置，最细的神经为减压神经，比减压神经稍粗的是交感神经，最粗的是迷走神经，再行分离。分离时注意采取“先观察后分离，先神经后血管，先细后粗”的原则，在每条神经和血管下面分别穿线备用。颈外静脉位于颈部皮下，胸锁乳突肌外缘，常用止血钳作钝性分离。神经与血管的分离长度在2cm左右，并在其下穿线备用。

9.颈总动脉插管

向家兔静脉注射肝素（200U/kg）使其全身肝素化。动脉下穿两条手术线，其中一条尽量靠近头部结扎动脉远心端，然后用动脉夹夹闭近心端，两端的距离尽可能长。用眼科剪在动脉结扎线近心端侧紧靠结扎线剪一小口，剪口大小为血管管径的1/3～1/2，然后拿动脉插管向心脏方向插入，插入深度大约1cm即可。用另外一条手术线打结固定插管，然后将线的一端在动脉插管有突起的地方绕几圈，跟另外一头再次打结，此即动脉插管的二次固定，其目的也是防止插管滑脱。插管的另外一端跟压力换能器相连，打开动脉夹，就可以记录血压的变化情况。

10.颈外静脉插管

主要用于输液、测量中心静脉压、药物的注射和取血。静脉插管多为塑料管或硅胶管，相对于动脉插管软而粗，插管插入端常剪成斜面。在静脉下穿过两条手术线，插管前先用动脉夹夹闭静脉近心端，血液回流受阻使静脉充盈，然后结扎远心端。用手指或镊子柄将静脉托起，用眼科剪向着心脏方向在静脉靠远心端处剪一小口，剪口大小以刚好允许静脉插管插入为宜，向心脏方向插入插管。插管插入静脉长度一般为20～30mm，打结固定插管，静脉插管二次固定的方式跟动脉插管一样。

图1－4－1　家兔颈部结构

11.输尿管插管

（1）剪去耻骨联合以上6cm范围内的毛发。

（2）用止血钳在耻骨联合上缘约3mm处沿腹白线将腹部皮肤提起，组织剪剪开皮肤，游离皮肤与腹壁肌肉层组织，同样的方式腹壁肌肉层剪开，但须注意勿伤及腹腔内脏器官。

（3）寻找膀胱，并将其上翻移至腹外，仔细分辨输尿管进入膀胱背侧的部位，用玻璃分针游离输尿管。

（4）在其中一条输尿管靠近膀胱处用手术线打一松结备用，用小眼科镊的镊柄将输尿管垫起，拿眼科剪在输尿管上剪小口，然后将事先充满生理盐水的输尿管导管向肾脏方向插入输尿管。然后用手术线结扎固定插管，并做二次固定。

（5）手术结束后，用温热（37℃左右）生理盐水浸湿过的纱布覆盖腹部切口，以减少水分蒸发和保持腹腔的温度。若需长时间收集尿液，可用止血钳钳夹或缝合的方式关闭腹腔。

12.处死

向家兔耳缘静脉注射空气，直到其死亡为止。

七、注意事项

1.使用实验器械需严格遵守使用规范，严禁超范围使用。

2.麻醉动物时，可先快后慢，即麻醉药理论药量的前1/3可快速推注，后2/3缓慢注射，同时须注意家兔的呼吸。

3.分离神经血管时应掌握先神经后血管、先细后粗的原则，须特别注意保持局部的自然解剖位置，不要把结构关系搞乱。