目前尚无合适的体外评价方法，鼻腔给药的脑靶向性评价大都采用药动学方法或者药效学方法。
1.脑组织匀浆法
给药后按设定的实验时间取动物全脑，去除脑膜和血污后，分离不同的脑组织(如嗅球、小脑等)，称重、匀浆、样品预处理后测定药物含量。该方法是最广泛使用的方法之一，样本量大，样品处理方法简单，但手术操作难度较高，且每只老鼠只能得到一个时间点的药物浓度，实验动物个体间的差异也较大。
2.微透析法
脑微透析技术是一种在体或离体脑化学采样技术，与传统的研究方法相比，脑微透析取样不会改变脑脊液总量，即不会影响实验动物的正常生理功能。同时，测定的是脑细胞外液中非结合药物浓度随时间的变化。这一技术对于研究具有脑靶向、脑内活性效应的药物来说，有不可替代的作用，适用于活体生化研究及脑深部区域研究。但是其样品量少，浓度低，分析方法要求较高。
3.小脑延髓穿刺法
给药一定时间后，剪开头颈背侧皮肤，暴露枕骨大孔，注射器接4号针头刺入小脑延髓池，抽取脑脊液(cerebral spinal fluid，CSF)，测定其中药物含量。大鼠CSF仅有100～150μL，抽出后无足够CSF补充，正常颅内压难以维持，故本法单只大鼠只能得到给药后一定时间点的CSF浓度，不能获得药物在CSF中的动态分布，也不能区分不同脑组织中药物分布。所以需要动物数量较大方能达到实验目的。
4.同位素标记法
可采用同位素标记法测定给药后药物的含量。该方法检测灵敏度高，且无需组织匀浆后繁琐的药物提取步骤，减少实验误差。常用的同位素有3H、14C和125I。本法灵敏度高，但不能区分原药、降解物或结合物，测定的总放射性不等于真实浓度。
实例6-2丹参素异丙酯经鼻脑靶向性评价
【文献来源:赵晓旭，导师:张亚军.丹参素异丙酯经鼻吸收和脑靶向性研究.西北大学硕士学位论文，2014】
1.HPLC-FLD测定脑脊液中丹参素异丙酯和丹参素的含量
色谱柱为Agilent TC-C18(250mm×4.6mm，5μm);流动相为甲醇∶水(梯度洗脱程序略);荧光检测波长:λex=278nm，λem=320nm;流速:0.6mL/min;柱温:25℃。
2.鼻腔给药方法
大鼠腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)麻醉。小心切开颈部皮肤与肌肉，采取钝性分离方法充分暴露气管和食管。结扎食管，同时切开气管，取聚乙烯管2支，一支插入下部分气管，以保证大鼠正常呼吸;另一支插入上部分管，直至鼻腔后部有阻力为止。用外科手术医用胶将鼻腔与口腔的鼻腭通道封闭，以防止药液从口腔中流失。用微透析灌注器吸取一定量的药液，灌注器针头连接一柔软PE管，插入大鼠一侧鼻腔5mm，缓慢给鼻腔内滴药，一次滴入量60μL。
3.脑脊液收集及样品处理方法
取毛细管一根，于一端加热并迅速拉直，做出一个尖头，磨平尖头并保证毛细管通畅。将大鼠头部固定，使头部平行并与颈部呈135°左右的角度。固定后通过触摸找到枕骨嵴，将大鼠皮肤切开后，可发现枕骨嵴后有一肌肉间隙，用挂钩将肌肉向两侧展开，枕骨嵴下3mm处触摸有三角形凹陷，此即进针点。进针角度与大鼠平行，将毛细管尖头插入小脑延髓池。当针尖刺透黄韧带后，脑脊液自然从毛细管中流出，每只老鼠约120μL脑脊液。脑脊液样品离心取上清液80μL加入240μL甲醇沉淀蛋白，涡旋振荡1min混匀，离心取上清液，氮气吹干，100μL流动相复溶，过0.45μm微孔滤膜，进样20μL分析，将峰面积代入标准曲线方程，计算峰面积。
4.经鼻给药脑脊液中丹参素异丙酯的经时变化
大鼠经鼻给药后，脑脊液中可以在30min内测得丹参素异丙酯及丹参素，相同药物剂量经尾静脉注射给药后，脑脊液中未发现丹参素异丙酯及丹参素。根据大鼠鼻腔在体循环灌流结果可知，丹参素不能透过鼻腔黏膜，表明脑脊液中的丹参素是丹参素异丙酯进入脑内的分解产物。将丹参素含量转化成丹参素异丙酯的含量，计算药物在脑脊液中的含量。计算方法为丹参素异丙酯的脑脊液含量=(丹参素异丙酯的分子量/丹参素的分子量)×脑脊液中测得丹参素的含量。以时间为横坐标(min)，脑脊液中药物总量为纵坐标(μg/mL)制作药-时曲线，见图6-3。
图6-3 脑脊液药-时曲线图
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