(一)原理
免疫组织化学的基本原理是在组织切片、细胞涂片、印片或细胞爬片上进行抗原抗体反应,通过有色染料标记显示反应结果,从而实现目标蛋白的原位检测。由于在常规染色光镜条件下抗原抗体复合物是不可见物质,只有通过对抗体标记,使之与一些化学物质结合后出现可见颜色或发光,才能检测到。
常用的抗体标记物有:酶蛋白类标记物、亲和组织化学标记物和荧光标记物,染色方法也依据抗体标记物种类分为免疫酶组织化学法、亲和免疫组织化学法和免疫荧光组织化学法。应用较多的酶蛋白类标记物是辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)。HRP能使3′,3-二氨基联苯胺(3′,3-diaminobezidine,DAB)变为不溶于水及有机溶剂的棕黄色颗粒,DAB棕。AP能水解α-萘酚磷酸酯,使偶氮染料,如快蓝(fast blue)、快红(fast red)、新复红(new fudcion)等显色。亲和组织化学标记是用亲和物质与抗体结合,再利用亲和物质特异结合特点进行标记、显色。常用于标记的亲和物质对有:生物素(biotin)-卵白素(avidin,又称亲和素、抗生物素)系统、葡萄球菌蛋白A和IgG的Fc段系统。荧光标记物常用的有发明亮黄绿色荧光的异硫氰酸荧光素(fluorenscenin isothiocyanate,FITC)、发橙红色荧光的四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothiocyanate,TMRITC)、发明亮橙色荧光的四乙基罗丹明(tetraethyl rhodamine,RB200)及发鲜红色荧光的Cy3等。
(二)分类
为使染色反应特异、敏感和染色方法简便、适用,人们不断改进染色方法。依据标记物在染色反应中的标记位置,染色方法分为直接法(一步法,直接标记与抗原结合的抗体、一抗),间接法(二步、三步或多步法,标记抗一抗抗体、二抗)和桥接法(标记三抗,二抗为桥接抗体,其一价与一抗结合,另一价与三抗结合)。常用的染色方法主要有:过氧化物酶法(peroxidase antiperoxidase,PAP法)、卵白素-生物素-过氧化物酶复合法(avidin biotin-peroxidase complex,ABC法)、链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(streptavidinperoxidase complex,SP法)、Envision法等(图6-2)。为了能在同一张组织切片或细胞涂片上同时显示2种或多种抗原,也可用双重或多重染色法。
图6-2 染色方法原理
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
