骨钙素测定

一、概 述

骨钙素(osteocalcin或bone gla protine,BGP)是骨中含量十分丰富的非胶原蛋白,是单链多肽,分子量为5800D,由49个氨基酸组成。人完整的BGP可以用胰蛋白酶水解成3个片段,即N末端(1～19氨基酸)、中段(20～43氨基酸)和C末端(44～49氨基酸)。它系由成骨细胞合成和分泌,与羟磷灰石有强的亲和力,约50%沉着于骨基质,其余50%进入血循环。人血中BGP迅速在肾小球滤过,大量BGP片段可在尿中被测到。血中BGP水平与青春发育期骨骼生长有关,儿童明显高于成年人,有报道女性高于男性,绝经后妇女高于绝经前。

血BGP的半衰期约5min,因此,监测其血中浓度,不仅能反映成骨细胞活性,而且可以帮助观察药物治疗后的动态改变。

二、病人准备

患者每天给予钙和维生素D3治疗时可使其浓度下降;血标本必须在经过一段禁食后的早晨采集;青春期血清骨钙素开始下降直到20岁才缓慢上升;绝经后早期的妇女浓度水平明显高于绝经前的水平;戒酒者明显增高,乙醇中毒者明显降低。

三、标本采集

1.采集时间 上午8:00～9:00间采集空腹血,骨钙素具有生物节律性,早晨高,下午和傍晚达最低点,其后逐渐上升,午夜和凌晨4:00间达到最高浓度,因此,应定点采集;用预冷注射器肝素或EDTA盐抗凝采静脉血2ml,为抑制蛋白酶活性需加抑肽酶(aprotinin 500U/ml血),置冰水浴中尽快送检。

2.标本保存 收到标本后4℃离心分离血浆待测或-20℃冻存,标本冷藏不能超过6h,避免反复冻融,因为反复冻融可使血清骨钙素浓度明显下降。

四、试验方法及正常参考范围

1.放射免疫分析法 标准或样品中的BGP和加入的125 I-BGP共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。125 I-BGP和抗体的结合量与标准或样品中BGP的含量呈一定的函数关系。用免疫分离试剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后,测定结合部分的放射性强度,并计算相应结合率B/B0。用已知标准BGP含量与对应结合率作图,即得标准抑制曲线。从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中BGP的含量。

正常参考范围 1.8～8.4ng/ml

2.电化学发光免疫分析法 采用双抗体夹心法,将标本、生物素化的骨钙素单克隆抗体和钌标记的抗骨钙素单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。反应混合液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。其强度与检样中一定范围的BGP含量呈正比。

正常参考范围　健康女性:停经前>20岁11～43ng/ml

　　　　　　　　　　　停经后15～46 ng/ml

　　　　　　　　　　　骨质疏松患者13～48 ng/ml

健康男性:18-30岁24～70 ng/ml

　　　　30-50岁14～42 ng/ml

　　　　50-70岁14～46 ng/ml

五、临床意义

1.BGP升高多见于代谢性骨病骨转换增快者,BGP水平升高,见于肾性骨营养不良、畸形性骨炎、原发性和继发性甲状旁腺功能亢进症、甲状腺功能亢进症以及肢端肥大症。

2.BGP降低多见于当骨转换降低时,血BGP水平亦降低,如甲状旁腺功能减退症、甲状腺功能减退症以及皮质醇过多使成骨细胞功能被抑制等情况。