一、概 述
为探讨甲状腺疾病的病因及发病机制,甲状腺自身抗体检查已被列为甲状腺疾病的检查项目之一,主要包括甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGA)和甲状腺微粒体抗体(thyroid microsomal antibody,TMA),随着单克隆抗体、免疫印迹、重组DNA技术的应用,业已证实甲状腺微粒体抗原(thyroid microsomal antigen,TMAg)或其主要抗原成分就是甲状腺过氧化物酶(anti-thyroid peroxidase,TPO),因此,现在多检测抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-thyroid peroxidase antibody,TPOAb)。
二、病人准备
(一)药物
1.一般用于治疗动脉硬化、中风、脂类代谢异常、高血压、冠心病和血液循环障碍性疾病的药品中均含有生物素,由于电化学发光免疫分析法的试剂中有生物素化的抗体参与,因此,接受高剂量生物素(>5mg/d)治疗的病人,至少要等最后1次摄入生物素8h后才能采血。
2.131 I治疗使抗体滴度升高,峰值可维持2～3个月。
3.用甲状腺激素替代治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎可使抗体滴度轻中度降低。
4.皮质醇类和抗甲状腺药物治疗可降低抗体滴度。
5.干扰素可增加抗体的产生。
(二)饮食
正常饮食。
(三)影响因素
1.甲状腺次全切或全切可使抗体滴度下降。
2.用甲状腺激素替代治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎可使抗体滴度轻中度降低。
3.患慢性淋巴细胞性甲状腺炎的儿童和孕妇抗体滴度较低,孕妇产后升高。
4.高滴度的甲状腺球蛋白对抗甲状腺过氧化物酶抗体无察觉性影响,但对甲状腺球蛋白抗体影响较大。
三、标本采集
1.采集时间 清晨空腹,采集静脉血于普通试管(或抗凝管)中,4h内送检。
2.标本保存
(1)血清:用标准样本管采集标本,离心分离血清。
(2)血浆:肝素、抗凝铵,EDTA-K3,柠檬酸钠,氟化钠、草酸钾均可作为抗凝剂,离心分离血浆。
分离后的血清或血浆在2～8℃可稳定7d,-20℃至少可稳定1个月,禁用叠氮钠防腐。
四、试验方法及正常参考范围
TGA、TPOAb的测定
1.间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence method,IIF) 采用人或猴甲状腺的冷冻组织切片作为抗原片,于其上滴加稀释的待测血清,如血清中有A-TG或A-TM存在,则可与细胞中TG或TM抗原结合形成抗原抗体复合物。经充分洗涤除去未结合物后,再加异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG于抗原片上,形成抗原-抗体-荧光素标记的抗人IgG反应复合物,经充分洗涤后在荧光显微镜下观察。
正常人血清A-TG和A-TM抗体为阴性,抗体滴度均<1∶10。
2.酶联免疫分析法 用提取的TG天然抗原或基因重组的TPO抗原包被酶免反应微孔板,使固相化。加入稀释的待测血清,如有TGA或TPOAb即可与包被的抗原结合形成固相抗原与抗体的复合物,再一次加入酶标记抗人IgG酶底物/色原溶液,即可产生颜色反应,呈色程度用酶标仪测定,可反应TGA或TPOAb的水平。
3.放射免疫分析法 待测血清中TGA或TPOAb与125 I标记的TG或TPO特异性结合,形成相应的带有放射性的抗原-抗体复合物。加入羊抗人IgG(第二抗体),进一步形成125 ITG(125 I-TPO)-TGA(TPOAb)-羊抗人IgG复合物,用离心法将复合物沉淀,测定沉淀物的放射性,即可反映血清中TGA或TPOAb的水平。
正常参考范围 TGA结合率<30%
TPOAb结合率<15%
4.电化学发光免疫分析法 测定TGA和TPOAb是采用竞争法。待测血清中TGA和TPOAb与三联吡啶钌标记的纯化TGA和TPOAb竞争结合生物素化的TG或TPO,利用链霉亲和素包被的磁性微粒将上述结合的抗原抗体复合物吸附,待测血清中TGA和TPOAb越多,与生物素化TG或TPO结合的就越多,磁性微粒捕获的三联吡啶钌标记的TGA和TPOAb与生物素化的TG或TPO结合物就越少。洗去未结合物,流动池中充以电子供体三丙胺(TPA),电极上通电,三联吡啶钌与TPA发生电化学发光反应,发光强度与待测血清中TGA和TPOAb水平成反比。
正常参考范围 TGA:0～115U/ml
TPOAb:0～34U/ml
五、临床意义
1.未知病因的TSH升高的诊断。
2.产后甲状腺炎(孕期或产后)危险筛选。
3.未知病因的甲状腺功能亢进症的鉴别诊断。
4.自身免疫性甲状腺疾病的家族性评价。
5.50%～90%的Graves病患者有低水平的TGAb和TPOAb,具有较高水平TPOAb的Graves病患者,以后发生甲状腺功能减退症的可能性较大。
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