霍乱弧菌测定

霍乱（cholera）是由霍乱弧菌所致的烈性肠道传染病。霍乱弧菌是弧菌属的一个种，按照菌体O抗原的不同，这个种分为若干血清型，按世界卫生组织的规定，O1群和O139群霍乱弧菌是霍乱的病原体。这两种血清群霍乱弧菌的生物学特性和致病机制大致相同。霍乱是急性肠道传染病，具有发病急、传播快、波及面广的特点，危害十分严重，影响人民生活、生产及旅游、外贸等正常交往，因而被WHO规定为必须实施国际卫生检疫的三种传染病之一（其余两种为鼠疫和黄热病），在中国属法定管理的“甲类”传染病。

霍乱弧菌包括两个生物型，即古典生物型和埃尔托生物型，属弧菌科弧菌属。为革兰染色阴性弧菌。菌体短小，弧形或逗点状，单端有一根鞭毛，运动极为活泼。在暗视野显微镜下观察，犹如夜空中的流星，无芽孢，无荚膜，能发酵蔗糖和甘露糖，不发酵阿拉伯胶糖，皆与霍乱多价血清发生凝集。对营养要求简单，霍乱弧菌是繁殖速度最快的细菌之一，在普通碱性蛋白胨水中生长迅速。最适酸碱度为pH＝7．2～7．4，最适生长温度为37℃。由于对酸非常敏感而对碱耐受性大，可与其他不易在碱性培养基上生长的肠道菌相鉴别。两个生物型有相同的抗原结构，均属O1群霍乱弧菌，可分为小川（Ogawa）、稻叶（Inaba）和彦岛（Hikojima）3个不同的血清型。

霍乱自古以来即在印度恒河三角洲呈地方性流行，1817-1923年百余年间发生过6次世界大流行。于1883年第5次大流行中，Koch从埃及患者粪便中首次发现了霍乱弧菌。1905年Cotschlich在埃及西奈半岛的埃尔托（El-Tor）检疫站从麦加朝圣者尸体分离出类似霍乱弧菌菌株，命名为El-Tor弧菌，后将El-Tor弧菌所致疾病称为副霍乱。由于两种弧菌的形态和血清学特性基本一样，临床表现及防治也完全相同，故1962年5月第十五届世界卫生大会决定将两者所致的疾病统称为霍乱。1937年至1958年间，印度尼西亚的西里伯岛先后发生4次El-Tor霍乱的流行；1961年El-Tor霍乱迅速从印度尼西亚向外扩散，引起第7次世界性霍乱大流行，波及五大洲140多个国家和地区，流行时起时伏，至今尚无停息的迹象。1992年10月起，印度和孟加拉国相继发生典型的霍乱样腹泻大流行，流行范围不断扩大，从病人分离的菌株不能被O1群霍乱弧菌诊断血清所凝集，因此被认为是一种新型霍乱弧菌，后被命名为O139群霍乱弧菌。此菌能产生霍乱肠毒素，具有发生大流行的潜力，从临床和流行病学上与O1群引起的霍乱很难区别，世界卫生组织要求各国对O139群菌引起的腹泻病例应按《国际卫生条例》有关霍乱的规定报告和处理。O139霍乱至今仍在一些国家和地区流行。1820年该病传入我国，新中国成立前每次世界大流行均波及我国，曾引起上百次大小流行。新中国成立后曾一度绝迹，但由于现代交通的发达，中国与国际交往的频繁，使本病再度传入中国，近年来也曾出现地方性散发流行。

经口感染的霍乱弧菌，正常情况下可被胃酸杀灭。当胃酸分泌减少或被高度稀释或入侵的弧菌数量过多，霍乱弧菌即可通过胃进入小肠。进入小肠的霍乱弧菌依靠鞭毛运动穿过肠黏膜表面的黏液层，黏附于肠壁上皮细胞刷状缘的微绒毛上，在其上繁殖并释放霍乱肠毒素（外毒素），并激活腺苷环化酶，使其含量增加，刺激肠黏膜细胞分泌大量电解质至小肠。造成大量的电解质溶液在肠道形成水样大便，肠液中的黏液和胆汁分泌的减少及使大便外观呈“米泔水样”。水样大便的渗透压与血浆相同。霍乱肠毒素不引起肠黏膜形态改变，不改变肠黏膜对蛋白质的通透性，也不影响对单糖或氨基酸的吸收。霍乱的所有症状、体征及代谢改变都与富含电解质的液体丢失有关。霍乱患者的血容量不足如未能及时控制，低血压持续时间较长，使肾长期缺血缺氧、组织缺钾以及毒素作用，可引起肾小管变性、坏死而出现急性肾衰竭。

病人和带菌者是该病传染源。典型病人发病期间排泄物中含有大量霍乱弧菌，患者排菌量大、污染面广，是重要传染源；而轻型病人易被漏诊，不能及时隔离治疗，带菌者则不易发现，这三者在该病传播中都起重要作用。霍乱可通过水、食物、日常生活接触和苍蝇传播，在这四种传播途径中水是最主要的，历次较大流行和暴发多与水源污染有关，其次是食物（包括某些水产品、冷饮等），也常常引起该病的局部暴发和流行。人普遍易感，无年龄、性别、种族差异。霍乱弧菌对直射阳光、干燥、高温、酸和各种消毒剂均敏感，加热到60℃10min或100℃立即死亡。霍乱弧菌对低温和碱耐受力较强，对酸和强氧化剂极为敏感，对含氯消毒剂15分钟可被杀死。因此，对霍乱的防治要贯彻“预防为主”的原则，及早发现疫情，控制传染源，切断传播途径、保护易感人群，防止霍乱的流行及暴发。

霍乱病的病原诊断一般多采用细菌分离鉴定法。此法须经过增菌、分离培养及血清学鉴定等多个步骤，至少需要20h才能得出确切结果。近年来，陆续报道了一些快速诊断方法，如多聚酶链反应法（PCR），但此法至少也要4～6h才能得出结果，且实验条件要求高，需要特殊的实验室才能进行，因此很难在临床和防疫工作中推广。金标法可用于霍乱病的快速初筛，具有操作简便、快速、准确，结果易于判读、无需仪器等特点，适于医院肠道门诊和部队疫区现场使用，具有推广意义。

【检测原理】　采用胶体金免疫层析双抗体夹心法，检测标本中霍乱弧菌。以胶体金作为标记物，交联抗霍乱弧菌（O1群、O139群或O1群El-Tor型的小川血清型）单克隆抗体，与样品中的霍乱弧菌（O1群、O139群或O1群El-Tor型的小川血清型）结合。形成双抗体夹心一步法，呈现出目测可见的红色条带，显色程度与抗原含量成正比。

【适应证】　对腹泻进行诊断与鉴别诊断。

【标本采集】　可疑粪便。

【参考范围】　阴性。

【操作方法】

1．用一次性取样管吸取粪便标本插至稀释液瓶中，盖上瓶盖。

2．将检测卡的尖端对准稀释液瓶盖上的开口处直接插入，试纸条下端接触液体，静置。

3．15min内，根据检测卡上检测线T线和质控线C线的颜色情况判断结果。

【结果判读】

1．阴性　在实验卡上只在质控区（C区）内见到粉红色条带，这说明实验操作可行，霍乱弧菌检测结果为阴性。

2．阳性　如果在实验卡的质控区（C区）和实验区（T区）分别出现两条清晰的条带，这说明实验结果为阳性，样品中有霍乱弧菌存在。条带之间的颜色差异不影响结果解释。

3．不确定结果　如果在实验卡的质控区内没有出现条带，不论实验区是否有条带，该结果应视为无效。建议使用新试剂，按照说明书重新实验。

【临床意义】　直接检测样本中的霍乱弧菌O1群特异性抗原A及O139，对霍乱病例进行快速筛查。

【局限性】　只能检测样本中的霍乱弧菌O1群特异性抗原A及O139。

【方法学优点】

1．灵敏度高　最低检出量不低于106／ml，适合临床需要。

2．特异性强　与常见15种肠道细菌无交叉反应。

3．操作简便、快速　稀释液直接裂解细菌，15min观察结果，满足疾病控制要求。

4．稳定性好　无须冷藏，常温保存18个月。

5．适合范围　各级防疫站、医院肠道门诊。