型分光光度计

（一）基本原理

一束单色光通过有色溶液时，溶液中的溶质能吸收其中的一部分。物质对光的吸收是有选择性的，一种物质对不同波长的光吸收的程度不同。

用透光率或光密度表示物质对光的吸收程度。如果入射光强度用I0表示，透射光强度用It表示，定义透光率为以T表示，即T＝It／I0。定义1g（I0／It）为吸光度 （或消光度、光密度），以A表示，即A＝lg（I0／It）。显然，T越小，或A越大，则溶液对光的吸收程度越大。

Lambert－Beer定律总结了溶液对光的吸收规律：一束单色光通过有色溶液时，有色溶液的吸光度A与溶液的浓度c和液层厚度L的乘积成正比。即：

A＝εc L

比例常数ε叫做吸光系数（光密度系数），它与物质的性质、入射光的波长和溶液的温度等因素有关。

由上式可以看出，当溶液层厚度一定时，溶液的吸光度只与溶液的浓度成正比。由T的定义可知，－lgT＝εcL，在同样条件下，透光率的负对数与溶液的浓度成正比。测定时一般只读取吸光度。

分光光度法就是以Lambert－Beer定律为基础建立起来的分析方法。一般在测量样品前，先测量一系列已知准确浓度的标准溶液的吸光度，画出吸光度－浓度曲线，作为工作曲线。样品的吸光度测出后，就可以在工作曲线上求出相应的浓度。

（二）仪器的安装与使用

1．安装

打开仪器包装箱后，应按装箱单检查仪器的配套件是否齐全，然后取出仪器电源线安装在仪器右后方的电源插座上，另一端与电源接通。

2．仪器各部分功能介绍 （图2－8）

图2－8 7220型分光光度计示意图

1．样品室门；2．显示窗；3．波长显示窗；4．波长调节旋钮；5．仪器电源开关；6．仪器操作键盘；7．样品池拉手；8．Rs232输出口 （选配）；9．打印输出口；10．电源插座

（1）样品室门：打开门 （向显示窗方向推，即可打开样品室门）可放置样品，关上门才可进行测量。

（2）显示窗：显示测量值。在不同的功能下，可以分别显示透射比、吸光度及浓度和错误显示。

（3）波长显示窗：显示当前波长值。

（4）波长调节旋钮：调节波长用，当转动波长旋钮时，显示窗的数字随之改变。

（5）仪器电源开关。

（6）仪器操作键盘。

（7）样品池拉手：前后拉动可改变四位样池的位置。

（8）Rs232输出口 （选配）。

（9）打印输出口。

（10）电源插座。

3．键盘

如图2－9所示：本仪器共有8个操作键，7个工作方式指示灯，当用户每选用一种工作方式时，该指示灯亮，当进行测量时，每按一次操作键其对应指示灯点亮一次，点亮时间与按键时间长短一致。

操作键的具体功能如下：

（1）方式选择键：共有4种工作方式供用户选择。这4种方式是透射比、吸光度、浓度及建曲线，每按此键一次可循环进入下一种工作方式，同时相应指示灯亮，指示当前工作状态。

（2）100％T ABS 0：调100％键：按此键后计算机对当前样品采样，调整电气系统放大量，并使显示器显示为100．0（％T）或0．000（ABS）。

按下此键后，仪器所有键被封锁，当调整100％T结束后，显示100（％T）或0．000（ABS）后键释放，此键只在透射比及吸光度档起作用。

图2－9 7220型分光光度计面板图

1．方式选择；2．100％，ABS；3．0％T；4．选择样点；5．置数加；6．置数减；7．确认；8．打印；9．功能指示灯

（3）0％T：调零键调整仪器零点，显示器显示0．0，应在全挡光的情况下，调零。此键只在透射比档起作用。

（4）选标样点：用户选择 （选标样点）功能时，需先按 （方式选择）键，使 “建曲线”功能指示灯亮，此时仪器处于选标样点建曲线功能状态下。

本仪器有3种曲线拟合方式供用户选择，分别是：一点法 （即输入一个标样浓度值建拟合曲线）、两点法 （即输入两个标样浓度值建拟合曲线）、三点法 （同理）。用户选择哪种曲线拟合方式，哪种拟合方式对应的指示灯亮。

用户在进行浓度测量前，必须首先建立标样浓度曲线 （即标准样品浓度曲线）。拟合曲线建好后，方可进行浓度测量，使用所选拟合曲线方式进行浓度测量，“第一点”（一点法）、“第二点”（二点法）、“第三点”（三点法）的指示灯，哪个指示灯亮表示选用几点法曲线拟合方式计算浓度。

如建拟合曲线时输入两个标样值，则在浓度测量时，把 “选标样点”指示灯放在二点法（“第二点”指示灯亮），表示实际测量选用的标准曲线是用二点法建立的。但若建曲线时，输入的是3个标样值，而在浓度测量时，把 “选标样点”指示灯放在二点法 （“第二点”灯亮），则此时表示实际测量选用的标准曲线为前两点标样值所建，第三标样值不起作用。

只有在建曲线状态下，选标样点键、置数键 （＋－）、确认键才起作用。

（5）置数加：标样浓度置入数字增加键，改变显示器数值，可使显示窗显示的数字增大（按键1次数字加1，按键时间超过0．5s，则数字连续递增）。该键只在建曲线功能下起作用。

（6）置数减：标样浓度置入数字减少键，改变显示器数值，可使显示窗的数字减少 （按键1次，数字减1，按键时间超过0．5s，则数字连续递减）。该键只在建曲线功能下起作用。

（7）确认：当按置数加 （减）键置好 （使显示窗数字与标样品浓度值一致）所需标样浓度值后按下此键，确认所输入的标样值，并对当前值的信号进行采集，作为标样A值 （一个标样浓度值）存入计算机内。当按确认键时要注意，显示器上的标样浓度应为光路中样品的标样值，当置入另一点标样时应注意改变光路中的标样 （拉动样品池拉手移动样品池），该键只在建曲线功能下起作用。

（8）打印：在不同的方式选择功能下，可打印出透射比值、吸光度值及浓度值，在不同功能下的打印内容为：①透过率；②吸光度；③浓度；④建曲线。

4．操作步骤

安装好仪器后，检查样池位置，使其处在光路中 （拉动拉手应感到每档的定位）。关好样品室门，打开仪器电源开关，方式选择指示灯应在透射比位置，选标样点应在第一点，显示器应为××．×，预热10min，即可以进行测量。

如果您选购了本仪器配置的微型打印机，则应先连接主机与打印机之间的线缆，插上打印机电源线。请注意：使用时必须先开启主机电源，后开打印机。

1）透射比测量

在样池中，放置空白及样品。①按需要调节波长旋钮，使显示窗显示所需波长值；②按（方式选择）键使透射比指示灯亮，并使空白溶液处在光路中；③按 （100％T）键调100％，待显示100．0时即表示已调好100％T；④在样池架中放挡光块，拉入光路，关好样品室门，观察显示是否为零，如不为0．0则按 （0％T）调零；⑤取出挡光块，放入空白溶液，关好样品室门，显示器应显示100．0，若不为100．0则应重调100％T（重复③）；⑥拉动样品拉手使被测样品依次进入光路，则显示器上依次显示样品的透射比值。

2）吸光度测量

吸光度测量与透射比测量基本相同，只是有两点要注意。

（1）在选择方式② （即l00％T ABS 0）时，应使吸光度指示灯亮。

（2）在选择方式③ （即0％T）调零时应在透射比功能下 （即方式选择指示灯放在透射比档，调零后再将方式选择指示放回吸光度档）。